基于复合靶解析SELEX技术的新型核酸适配体蛇毒拮抗剂的研究

Snakebite is a global public health problem, which will lead to permanent disability and even death without timely treatment.Although Antivenin is the specific drug for snakebite currently, it often lead to occuring serious serum allergic reaction enven death in clinical applications because of it be external serum . so the existing antivenin is a double-edged sword in the snakebite treatment. The nucleic acid aptamer is a kind of single DNA or RNA which can combinate with target specifictly and high affinitly.Compared with antibody it has low immunogenicity, wide target molecules and stable biological activity, etc. In previous studies we found that the nucleic acid aptamer show high affinity with cobra toxin cobrotoxin, so we put forward using the nucleic acid aptamer library to replace the existing antivenin for research of snakebite drug. We propose through the establishment of snake venom Decovolution-SELEX technology, which principle similar to "peel the onion" to screen and separate snake venom poison of nucleic acid aptamer, and constructs the resistance of snake venom aptamer library. In this study we first introduced the nucleic acid aptamer in the area of snake venom drug research, and will firstly establish the snake venom complex composite target Decovolution-SELEX technology for poison group study and development of drugs for snakebite treatment.

毒蛇伤害是一个全球性的公共卫生问题，因发病急进展快如不能得到及时救治易导致永久残疾甚至死亡。抗蛇毒血清是目前唯一的蛇伤特效药，但因其本质为外源性血清，临床应用中常发生严重的血清过敏反应，甚至导致死亡，是蛇伤救治中的一把双刃剑。核酸适配体是一种能与靶标分子高特异性、高亲和力结合的单链DNA或RNA，相比抗体其具有免疫原性低、靶分子广泛、生物活性稳定等优点，在前期的研究中我们发现核酸适配体能高亲和力结合中华眼镜蛇神经毒素，因此在本研究中我们提出利用核酸适配体库来替代现有的抗蛇毒血清用于抗蛇毒拮抗物的研究。本研究拟通过建立复合靶解析SELEX技术，通过类似"剥洋葱"的方法逐一分离和筛选蛇毒复合物中主要毒素的核酸适配体，并构建一种通用型抗蛇毒适配体库。本研究中我们首次将核酸适配体引入抗蛇毒药物的研究，并将首次建立针对蛇毒复合物的复合靶解析SELEX技术，为毒物组学研究及抗毒素药物的研究奠定基础

项目背景：毒蛇伤害是一个全球性的公共卫生问题，因发病急进展快如不能得到及时救治易导致永久残疾甚至死亡。抗蛇毒血清是目前唯一的蛇伤特效药，但因其本质为外源性血清，临床应用中常发生严重的血清过敏反应，甚至导致死亡，是蛇伤救治中的一把双刃剑，因此我们迫切需要找到一种更好的抗蛇毒治疗方法或药物。.主要研究内容：核酸适配体是一种能与靶标分子高特异性、高亲和力结合的单链DNA 或RNA，相比抗体其具有免疫原性低、靶分子广泛、生物活性稳定等优点，核酸适配体能高亲和力结合蛇毒素，因此在本研究中我们提出利用核酸适配体库来替代现有的抗蛇毒血清用于抗蛇毒拮抗物的研究。本研究拟通过建立复合靶解析SELEX 技术，通过类似“剥洋葱”的方法逐一分离和筛选蛇毒复合物中主要毒素的核酸适配体，并构建一种通用型抗蛇毒适配体库。.重要结果：1、构建了一种高灵敏度的基于电化学传感器与核酸外切酶III（Exonuclease III）循环靶标的非标记核酸检测体系，借助该检测体系将有助于我们检测蛇伤伤口中的微量蛇DNA，提高鉴别诊断的精确性。2、初步筛选得到了2条亲和性高、特异性好的蛇毒SVMP蛋白的适配体，其序列分别为：N8:GGGAGCTCAGAATAAACGCTCAACGCATTTCGCAACACGACTTGGCCAACGTACCTGGCAATCCGATCAAATTCGATC.N16:GGGAGCTCAGAATAAACGAATAACGCATTTCAAACACGACTTAACCAACGTACCTGGCAATCAGATCAAATTCTCGATC.3、筛选到6条与cobrotoxin毒素亲和性、特异性高的适配子，其序列分别为：N1：CCAGTAGCCATACCGGTTTGTGGATGGGGTGTATGCGAGT；N2：GATGGTGGATTGGAGCTTGTCGCAAAGGGTTCACCACATT；N7：GATGGCCTGCCCGATTTTCCGGAGGGGCGATCTGCACATGCCGCAACGGG；N12:TGCGAGCATCTCGCTATCAGAGTGAGGTGATTTGTGCATA;N16：CGATGGCCTGCCCGATTTTCCGGAGGGGCGATCTGCACATGCCGCAGCGGG；N17：CCAGTAGCCATACCGGTTTGTGGATGGGGTGTATGCGAGT；