我国登革热病毒分离株的E和NSI基因的克隆与表达

登革病毒是一类可经蚊媒传播而引起登革热的RNA病毒。本研究采用逆转录-PCR扩增了我国登革2型病毒株的含有多种重要抗原表位并可作为新型疫苗靶标的蛋白E和NSI基因，其长度与预期大小一致，分别为1.29和1.38Kb。通过分子生物学方法证实这些扩增产物是特异的。本研究在国内首先建立了登革病毒大基因片段的扩增方法。分别将这两种基因片段克隆到T-载体中，测得的5’端部分碱基序列均未发生改变。再分别用SalI/PstI及EcoRI/XhoI双酶切，从重组载体上回收E和NSI基因片段，并与经相应限制酶消化的pBV220载体DNA连接。对阳性重组子进行温控诱导表达，表达蛋白分子量分别为44Kd和51Kd，它们可与登革2型病毒株的多抗起特异的反应。本研究为登革热基因工程疫苗和亚单位疫苗的研制奠定基础。