新疆地区维吾尔族PTR高发的免疫学机制研究

Immune factors leading to platelet transfusion refractoriness (PTR) is a common problem after clinical platelet transfusion,its incidence is high and have seriously affects, therefore, immune-mediated PTR is an urgent problem to be studied and solved,the key to reduce the incidence of PTR is to clarify the pathogenesis of PTR.Domestic and foreign studies have shown that PTR is associated with the expression of HLA, HPA and glycoprotein in platelets, and polymorphism in different regions, races and populations,the interaction of genes affects the production of PTR.Previous studies have found that incidence of immune mediated PTR of uighurs in xinjiang region is far higher than that of han nationality, the cause and mechanism is not clear, the research that may interact with HLA and HPA gene polymorphism, and the abnormal expression of related proteins.This study intend to use molecular biology technology analysis platelets HPA gene、HLA gene and glycoprotein expression of patients with PTR in Xinjiang area, using the method of statistical analysis of fork and GMDR specific gene interaction PTR on Immune;compare the differences between different ethnic groups; establish the therapeutic strategy of PTR in Xinjiang.

免疫因素介导的血小板输注无效（PTR）是临床血小板输注常见问题，具有发生率高、危害大的特点，也是临床输血治疗亟待研究和解决的难题，降低其发生率重点在于阐明PTR的产生机制。目前认为PTR的产生与血小板HLA、HPA基因及蛋白异常表达相关，HLA、HPA基因在不同地区、种族、人群呈现多态性，其基因的交互作用影响着PTR的产生。前期研究发现新疆地区免疫介导PTR发生率维吾尔族远远高于汉族，原因及机制不清，课题组认为可能与HLA和HPA基因多态性、基因交互作用以及蛋白的异常表达相关。本研究拟采用分子生物技术对新疆地区PTR患者HLA、HPA基因多态性及交互作用进行分析比较，进而采用数量性状分析的方法对血小板膜糖蛋白异常表达情况进行研究，比较维汉两民族的差异性，明确新疆地区维吾尔族人群PTR高发的产生机制，建立符合新疆地区PTR的治疗策略。

预防和避免免疫性PTR发生是目前临床上输注血小板治疗的难题，其发生的重要原因是患者在多次输血后机体可产生HPA抗体、HLAⅠ类抗体、血小板膜糖蛋白GPⅣ（CD36）等血小板抗体，前期工作基础和国内外最新研究进展，发现免疫性PTR发生的免疫学机制可能与血小板抗体、HLA-I、HPA基因交互作用及血小板膜糖蛋白的异常表达密切相关。据此，课题组采用固相凝集法和ELISA法对PTR患者进行血小板抗体检测，通过流式细胞技术检测免疫性PTR患者血小板特异性抗体（抗GPIIb/IIIa、抗GPIa/IIa、抗GPIb/IX、抗GPIV）、血小板膜糖蛋白（CD36、CD61、CD41a）表达情况及外周血T/B淋巴细胞数量，运用SPSS19.0软件及R软件分析免疫性PTR与血小板膜糖蛋白、外周血T/B淋巴细胞的相关性，采用PCR-SSP、PCR-SBT对免疫性PTR患者进行HPA1-17等位基因分型、HLA-A、HLA-B基因分型检测，应用logistic回归分析比较基因与免疫PTR发生风险之间的相关性，采用多因子降维法GMDR0.7软件建模分析HPA分型基因之间以及HPA等位基因、HLA-A、HLA-B之间的交互作用。通过研究发现，本地区免疫性PTR患者不同民族、不同性别PTR患者产生血小板抗体具有差异性，血小板膜糖蛋白CD36和CD61的表达具有显著差异，CD36对免疫性PTR发生风险具有极大的预测价值，外周血CD8+T细胞比例增高，而CD4+T细胞比例减低。HPA-3多态性与免疫性PTR高发具有关联性，GMDR分析HPA不同分型交互作用模型中3阶（HPA-3,5,15）模型测试准确度最大（testing accuracy:0.625），交叉验证一致性最好（CVC=8/10），正向得分最高均为5.2，说明携带HPA-3 aa、HPA-5aa、HPA-15ab基因，发生PTR风险高。在HPA与HLA-A、HLA-B基因交互模型中，HLA*B和HPA-1 HLA*B为最佳模型，对预测免疫性PTR的发生具有重要意义。综上，通过研究本地区免疫性PTR患者的免疫功能状态及血小板基因表达情况，筛选预测免疫性PTR的最佳基因交互模型，有助于简便迅速的筛选配合性血小板输注，有利于降低免疫性PTR的发生率，保证患者输血安全，同时也可以有效节约血小板资源。