基于内皮祖细胞研究益气活血法治疗糖尿病血管病变的作用机制

本项目基于益气活血法（丹蛭降糖胶囊）对糖尿病并发症具有显著治疗效果的基础上，分别以整体动物及细胞水平研究丹蛭降糖胶囊对内皮祖细胞（EPC）作用及其机制。自发性OLETF大鼠糖尿病模型给予丹蛭降糖胶囊灌胃，流式细胞仪检测EPC数量及CRCX4表达率、ELISA法检测血清中SDF-1α含量；体外分离培养大鼠外周血EPC，采用血清药理学法考察丹蛭降糖胶囊对高糖引起EPC增殖、黏附、迁移、血管形成功能的影响，同时采用Western Blot和RT-PCR的方法分析含药血清对EPC的PI3K/Akt-eNOS途径以及MAPK途径的影响。探讨益气活血法防治糖尿病并发症的机制。

目的：本项目基于益气活血法（丹蛭降糖胶囊）临床上治疗糖尿病血管病变取得良好效果的前提，采用体内外结合的方法研究丹蛭降糖胶囊对糖尿病大鼠模型内皮祖细胞功能的调节及其作用机制，为阐明益气活血法防治糖尿病血管病变提供理论支持与实验依据。 方法：选用4周龄SD大鼠，采用小剂量链脲佐菌素腹腔注射加高糖高热量饲料喂养的方法建立2型糖尿病大鼠模型，给予不同剂量丹蛭降糖胶囊灌胃（分别为临床成人单位体重剂量12倍、8倍、4倍）、同时设马来酸罗格列酮为阳性对照组以及非糖尿病大鼠正常对照组，连续给药10周。观察丹蛭降糖胶囊对糖尿病大鼠外周血EPC的促进作用。制备丹蛭降糖胶囊含药血清，确定含药血清对高糖引起EPC损伤的保护作用以及对EPC分泌NO和VEGF的作用，并明确丹蛭降糖胶囊含药血清对EPC作用途径的影响。 结果：本研究以腹腔注射STZ法制备SD大鼠糖尿病模型（给药剂量为65 mg/kg），三天后尾静脉测血糖均大于16.0 mmol/L，糖尿病大鼠模型造模成功。分别对糖尿病大鼠灌胃给予（4倍、8倍、12倍临床治疗剂量）丹蛭降糖胶囊、阳性药马来酸罗格列酮、生理盐水2周后，腹腔取血通过ELISA法分析发现丹蛭降糖胶囊各实验组SDF-1α、VEGF水平与阳性药组相当，显示丹蛭降糖胶囊对外周EPC具有与阳性降糖药物相当的保护作用；分别将各实验组糖尿病大鼠血清用于在体外高糖与低糖条件下培养EPC，发现各给药实验组的大鼠血清均有利于改善EPC在含糖情况下培养的细胞生存率，Western Blotting法发现给药动物血清可以显著提高EPC中p-p38、p38、p-JNK、JNK、p-ERK、ERK1/2含量，ELISA法发现给药动物血清可以提高EPC分泌SDF-1α与VEGF。 结论：以上实验结果显示，丹蛭降糖胶囊可以保护糖尿病大鼠外周血中EPC的活性，分子生物学各项指标表明其保护作用与PI3K/Akt-eNOS途径相关，此外还可以通过增加SDF-1α分泌提高EPC的趋化能力。