加减地黄饮子对多巴胺能神经元生存微环境的调节作用和机制研究

Our previous research indicates that Jia-Jian-Di-Huang-Yin-Zi(JJDHYZ) slows the progress of Parkinson's disease in patients. However, the mechanisms are urgent to be explored. Based on previous research,we proposed the new concept of microenvironment of dopaminergic neuron.In this stuy, we use a mose model of Parkinson's disease to investigate the effects of JJDHYZ on microenvironment of dopaminergic neuron, and to detect effects of JJDHYZ on expression of cytokines/chemikines and the downstream signaling pathways of the key cytokines/chemikines in a mice model of parkinson's disease. We further use antibody to block CX3CR1 which is the specific receptor of CX3CL1. And then, by detecting effects of JJDHYZ on downstream pathways JAK2/STAT3、PI3K/Akt, and by investigating effects of JJDHYZ on structure and function of neurovascular unit, neurological behavioral function in mouse model of Parkinson's disease to clarify the mechanisms of JJDHYZ's protection on dopaminergic neuron and slowing progress of Parkinson's disease. This study will provide scientific evidence for clinical application of JJDHYZ.

我们前期研究表明加减地黄饮子具有延缓帕金森病病程进展的作用，但其机制尚有待进一步阐明。本项目提出多巴胺能神经元生存微环境的新概念并以加减地黄饮子对帕金森病小鼠多巴胺能神经元生存微环境影响为核心研究内容，在建立帕金森病细胞因子/化学差异表达谱和明确关键细胞/化学因子及其下游信号通路的基础上，采用中和抗体阻断趋化因子CX3CL1的特异性受体CX3CR1，通过观察加减地黄饮子对其下游JAK2/STAT3、PI3K/Akt信号转导通路的影响，比较各组帕金森病小鼠的神经行为学、神经血管单元结构和功能等效应指标的改变，阐明加减地黄饮子保护多巴胺能神经元进而延缓帕金森病进程的作用机制，为其临床应用提供科学依据。

在中医理论指导下，结合自身临床实践，我们发现加减地黄饮子在临床应用中能显著降低帕金森患者的帕金森病统一量表评分，减少左旋多巴的每日用量，同时延缓病情进展。在此基础上，我们通过体内实验从作用机制上阐明加减地黄饮子的神经保护作用。本研究以MPTP诱导的小鼠为研究对象，通过观察加减地黄饮子对帕金森小鼠神经行为、多巴胺能神经元、多巴胺类神经递质及神经营养因子（BDNF、GDNF）的保护作用；初步证实中药复方的神经保护作用可能与其提高PD小鼠脑源性神经营养因子BDNF和胶质源性神经营养因子GDNF含量，抑制氧化应激酶及脂质代谢产物的变化有关。在此基础上，课题组对加减地黄饮子的作用机制深入研究，发现加减地黄饮子通过参与调控线粒体-内质网介导的凋亡通路抑制MPTP诱导的多巴胺能神经元凋亡，显著降低凋亡通路上多种关键信号的表达。帕金森病病理状态下分泌和产生多种细胞因子及活性物质，这些产物可以通过作用于微血管，直接穿过血脑屏障，影响脑内微环境，加剧神经退行性病变。课题组从神经血管单元这一概念着手，深入发掘药物对多巴胺能神经元生存微环境中主要结构成分和细胞因子的调节作用，发现加减地黄饮子参与调控多巴胺能神经元生存微环境中神经血管单元结构，并参与调节微环境中胶质细胞介导的神经炎症及相关炎性因子的表达。通过本研究，我们初步证实加减地黄饮子的神经保护作用与其多靶点作用机制有关，后续仍需要更深入的研究为其防治帕金森病提供充分可靠的科学依据。