小续命汤对急性脑缺血后神经血管单元的保护作用及其机制研究

我们的前期临床和基础研究表明祛风通络法及其代表方小续命汤是治疗急性缺血性中风的有效方剂，初步揭示其作用机制与抑制脑缺血后细胞凋亡的启动有关，但其上游分子作用机制尚有待进一步阐明。本研究在神经血管单元的概念性框架指导下，采用局灶性脑缺血大鼠模型，观察小续命汤对急性脑缺血后神经血管单元各成分（神经元、星形胶质细胞、微血管）的微观结构和整体功能的保护作用，深入发掘基于汉唐中医中风理论的小续命汤对急性脑缺血损伤保护作用靶点；从PTEN/PI3K/Akt信号通路及其主要靶信号分子角度探讨小续命汤的神经血管单元保护作用的分子机制，以期为小续命汤治疗急性缺血性中风的现代科学机制提供实验依据。

为探讨小续命汤对急性脑缺血后神经血管单元的保护作用及相关机制，研究分两部分进行：.第一部分 小续命汤对急性脑缺血后神经血管单元的保护作用：将雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham)，脑缺血再灌注组(I/R)，I/R+小续命汤低剂量组(15g/kg/day)(XXMD15)，I/R +小续命汤中剂量组(30g/kg/day)(XXMD30)，I/R +小续命汤高剂量组(60 g/kg/day)(XXMD60)。采用MCAO法建立脑缺血再灌注损伤模型，观察不同时间点各组大鼠的行为学改变；脑缺血再灌注24 h后，取材进行TTC染色并计算脑梗死面积及半球肿胀；HE染色评估实验各组脑缺血病理性损害；通过透射电镜观察血脑屏障亚显微结构的变化。通过测定脑含水量、伊文思蓝渗出量评估脑水肿形成及血脑屏障通透性改变。结果表明小续命汤(60 g/kg/day)科显著减轻急性脑缺血后神经元损伤，可从结构、功能上减轻脑缺血再灌注损伤导致的血脑屏障破坏，表明小续命汤对神经血管单元的保护作用。.第二部分 小续命汤的对急性脑缺血后神经血管单元的保护作用机制：将雄性SD大鼠随机分为Sham、I/R、XXMD60、XXMD60+LY294002、XXMD60+Vehicle组。脑缺血90 min再灌注24 h后，进行神经功能缺损评分，TTC 染色评价脑梗死面积，Nissl染色评估缺血皮层半暗带区的完整细胞数，TUNEL染色联合免疫荧光法检测缺血皮层半暗带区神经血管单元主要结构成分：神经元、星形胶质细胞、血管内皮细胞的损伤和凋亡情况。WB检测PI3K/Akt 通路及相关蛋白的表达。研究发现，小续命汤对急性脑缺血再灌注导致的神经血管单元内多种类型细胞均具有保护作用，但采用PI3K/Akt 通路抑制剂LY294002抑制该通路活性及其下游的靶分子以后，小续命汤对神经血管单元的保护作用被抵消，表明小续命汤的作用机制可能与其对PI3K/Akt信号通路的活化有关。