利用抗原特异性记忆性T细胞探讨胸腺手术不同疗效的重症肌力的发病机制

众所周知，MG患者存在着以体液免疫反应为主的免疫偏离现象。前期的研究我们发现，利用BCG作为抗原体外刺激接种过BCG疫苗的MG患者（未经治疗）的外周血单个核细胞IFN-γ的分泌量明显高于正常人，在胸腺术后IFN-γ的分泌量下降。手术疗效不好的患者术前外周血中IFN-γ分泌量更高，说明免疫偏离会影响抗原特异性的应答反应。本研究在胸腺切除前后在MG患者的外周血中利用BCG判断记忆性T细胞的功能，利用流式细胞术检测T细胞功能变化主要是何种细胞对胸腺切除产生的应答，利用ELISA方法证实胸腺切除疗效好与不好MG患者体液免疫的改变，进一步探讨胸腺在MG发病机制中的作用。从宏观和微观水平阐明影响胸腺切除术疗效的可能因素，旨在获得MG患者胸腺切除前后免疫异常的可靠证据，寻找具有可预测手术疗效的免疫因子和治疗MG患者的新靶点，拓展MG细胞免疫发病机制的研究。

胸腺切除术也已成为治疗MG的重要方法。我们前期的研究发现有一部分患者术后没有达到预想的结果。长期存在的免疫记忆性T细胞的数量和功能在影响手术及术后疗效中起着相当重要的作用。目的：1）判断记忆性T细胞在MG患者中数量的改变，证实MG患者体内存在免疫记忆紊乱；2）利用BCG判断记忆性T细胞在MG患者中功能的改变，探讨其对MG患者胸腺切除手术疗效的影响；3）明确MG患者体内存在TFH细胞的稳态失调，探讨TFH细胞的稳态失调在MG免疫发病中的作用。方法：1）利用流式细胞技术，检测MG患者与正常对照外周血单个核细胞中的T细胞各自的表达情况；2）用ELISA方法检测进行胸腺切除手术的MG患者手术前后及正常对照PBMCs在卡介苗的刺激下，γ-干扰素，白介素17的分泌量；3）流式细胞术检测TFH细胞的不同表型在MG患者增生胸腺单个核细胞中的频率，免疫荧光双标法确定共表达CXCR5和CD4的T细胞在胸腺中的定位；结果：1）与健康对照比较，MG患者CD4+、CD8+T细胞异常率显著增高，CD4+CD45RO+T细胞数量减少，CD4+CD45RO+CCR7+、CD8+CD45RO+CCR7+、 CD4+CD45RO+CD44highT细胞数目显著增加；2）与健康对照比较，MG患者术前外周血PBMCs在BCG的刺激下，IFN-γ、IL-17的分泌量显著增高，术后IFN-γ、IL-17的分泌量下降，并趋于正常。手术疗效好的患者IFN-γ分泌量显著低于手术无效的患者，两组比较，IL-17无明显差异；3）CXCR5+CD4+T细胞可见在MG增生胸腺异位的GC中聚集；4）MG患者外周血循环TFH细胞在CD4+T细胞中的频率与血清anti-AchR Ab的浓度呈正相关；结论：1）MG患者存在细胞免疫紊乱，效应记忆性T细胞、活化记忆性T细胞的数目增多可能是MG发病过程中的一个外周免疫机制；2）MG患者记忆性T细胞的功能增强，术后T细胞的功能可趋于正常，可见这种功能的增强是由胸腺维持的。MG患者外周记忆性T细胞功能增强可能是影响胸腺切除手术疗效的一个重要因素；3）TFH细胞可能参与了MG增生胸腺中异位GC的形成；MG患者外周血中循环TFH细胞可能与外周Anti-AChR Ab的产生有关。