重症肌无力胸腺肌样细胞缺乏DAF在胸腺内启动AChR异常免疫应答

Myasthenia gravis (MG) is a typical autoimmune disease of central nervous system. It is well-considered that the pathogenesis of MG is closely associated with thymus. But so far, it remains unclear that why and how MG thymus initiates an autoimmune response to AChR. Accumulating data indicate MG thymus contain cellular components required to initiate an autoimmune response to AChR: myoid cells expressing acetylcholine receptor (AChR) antigen, professional antigen presenting cells-dendritic cell (DC) that can efficiently present autoimmunogenic epitopes, autoreactive T cells, and germinal center(GC) in which B cells proliferate and secrete antibody. Newly study indicates myoid cell in MG thymus lack the expression of complement regulator-DAF. Therefore, we presume myoid cell in MG thymus is vulnerable to complement-mediated damage because of low-expression of complement regulator. AChR can be exposed, captured and presented to autoreactive T cells, finally helping B cells secreting antibody in thymic GC, and initiating an autoimmune response to AChR. Our study will discuss the relationship among thymic myoid cells, thymic DCs,DAF,GC and MG from the level of MG patients as well as in vitro and in vivo, which is of significance in unfolding intrathymic pathogenesis of MG.

重症肌无力（MG）是典型的神经系统自身免疫性疾病。目前公认MG的发生与胸腺密切相关。但迄今为止，MG患者胸腺为何、如何启动异常免疫应答尚不明确。众多研究表明，MG患者胸腺在结构上具备激发异常免疫应答的条件：表达乙酰胆碱受体(AChR)的肌样细胞，专职的抗原递呈细胞-树突状细胞（DC），自身反应性T细胞以及B细胞增殖、产生抗体的场所-异位生发中心（GC）。新近的研究发现MG患者肌样细胞缺乏补体调节因子DAF的表达。因此，我们推测MG患者胸腺肌样细胞因缺乏补体调节因子-DAF的保护，易受补体攻击、损伤，使原本在胸腺内隐蔽的AChR抗原暴露，被树突状细胞摄取、提呈抗原信息给AChR反应性T细胞，在胸腺GC中辅助B细胞产生抗体，引起针对AChR的异常免疫应答。本研究将从MG患者及体内、体外水平集中探讨胸腺肌样细胞、胸腺树突状细胞、DAF及GC与MG之间的关系，对揭示MG胸腺发病机制具有重要意义。

重症肌无力（MG）是典型的神经系统自身免疫性疾病。目前公认MG的发生与胸腺密切相关。但迄今为止，MG患者胸腺为何、如何启动异常免疫应答尚不明确。众多研究表明，MG 患者胸腺在结构上具备激发异常免疫应答的条件：表达乙酰胆碱受体(AChR)的肌样细胞，专职的抗原递呈细胞-树突状细胞（DC），自身反应性T细胞以及B细胞增殖、产生抗体的场所-异位生发中心（GC）。新近的研究发现MG患者肌样细胞缺乏补体调节因子 DAF 的表达。本课题通过大样本收集重症肌无力患者及正常健康年龄匹配的胸腺组织，免疫组化结果发现：胸腺肌样细胞与树突状细胞在MG组均高表达，有统计学意义，尤以树突状细胞表达增高明显；同时发现：补体C9在MG组高表达，而DAF的表达因子CD55，在MG组表达明显降低，与对照组相比，结果有统计学意义。ELISA检测发现MG组AChR抗体水平、IFN-γ、IL-4明显升高。.其后，课题组分离MG患者 （实验组）及正常健康对照 （对照组）胸腺细胞、胸腺肌样细胞（TMC）及胸腺树突状细胞（TDC），检测实验组与对照组TMC表面AChR及DAF表达存在明显差异，将TMC与AChR抗体及补体共孵育后观察TMC明显受损；检测实验组及对照组TDC膜表面MHCⅡ类分子的表达，发现TDC摄取抗原能力明显下降；接着课题组将实验组及对照组T细胞同TDC及AChR共孵育，ELISA检测细胞培养上清中IFN-γ、IL-4的分泌，Elispot检测特异性分泌IFN-γ、IL-4的T细胞频率，发现对照组T细胞频率明显低于实验组。将上一步中活化各组T细胞加对应胸腺B细胞共孵育，发现MG组抗体产生最高，加入AChR抗体及补体共孵育后观察TMC受损明显低于实验组。.最后，课题组提取大鼠肌肉组织AChR，注入Fisher大鼠胸腺，观察诱导MG率较低（约为40%）；将下调表达DAF的肌样细胞与大鼠AChR抗体及补体共同注入Fisher大鼠胸腺，观察诱导MG约65%，6周后取胸腺组织，免疫组化染色观察Fisher大鼠胸腺中相应免疫细胞和分子的表达，发现表达与EAMG组无明显差异。.课题首次集中研究胸腺肌样细胞、胸腺树突状细胞、补体调节因子-DAF、GC与重症肌无力发病之间的关系，以阐明重症肌无力患者胸腺为何、如何“启动”AChR异常免疫应答，即试图揭示重症肌无力产生的根源，具有明显的创新性。