miR-130b在肝细胞癌发病中的作用及其表达调控机制

课题组前期通过miRNA芯片筛选和定量PCR检测发现miR-130b在肝癌中发生明显的表达上调，并且其高表达与复发和不良预后相关，下调其表达可显著抑制肝癌细胞增殖和克隆形成能力，因此，我们推测miR-130b可能作为"oncomiR"参与了肝癌发病的过程。本课题拟通过基因功能获得和功能缺失策略，观察miR-130b表达改变对肝癌细胞生物学行为的影响；通过生物信息学分析及细胞学实验，结合临床资料分析对miR-130b的靶基因及其相关信号通路加以验证，从而揭示miR-130b在肝癌发病中的具体分子机制；进而克隆miR-130b上游转录调控区，构建其报告基因载体，通过报告基因活性分析、EMSA、ChIP等确定其受调控的转录因子，阐明miR-130b在肝癌中表达异常的机制。本课题旨在为更深入了解miRNA与肝癌发生发展的关系提供新线索，并为肝癌治疗寻找潜在分子靶点提供新的思路和依据。

miRNAs在肝癌的发生发展中起着重要的作用。课题组前期通过miRNA芯片筛选和定量PCR检测发现miR-130b在肝癌中发生明显的表达上调，并且其高表达与复发和不良预后相关，下调其表达可显著抑制肝癌细胞增殖和克隆形成能力，因此推测miR-130b 可能作为“oncomiR”参与了肝癌发病的过程。本项目的主要研究内容为：（1）通过基因功能获得和功能缺失策略，观察miR-130b表达改变对肝癌细胞生物学行为的影响；（2）通过生物信息学分析及细胞学实验，结合临床资料分析对miR-130b的靶基因及其相关信号通路加以验证，从而揭示miR-130b在肝癌发病中的具体分子机制；（3）进而确定miR-130b其受调控的转录因子，阐明miR-130b在肝癌中表达异常的机制。研究结果如下：（1）体内外实验表明miR-130b促进肝癌细胞增殖、迁移及体内外成瘤能力；（2）管形成试验和鸡胚尿囊膜试验表明miR-130b促进血管生成；（3）筛选出HOXA5、HIF-1α、GAX以及RUNX3等多个基因有可能为miR-130b的靶基因，并经过进一步验证，表明HOXA5、HIF-1α是miR-130b发挥其生物学功能的靶基因；（4）发现缺氧环境下肝癌细胞中 miR-130b表达升高，同时miR-130b可诱导肝癌细胞发生EMT 并增强其迁移能力；（5）发现缺氧环境下 miR-130b可上调肝癌细胞中HIF-1α 表达，而抑制HIF-1α 表达又可下调miR-130b的表达。本项目完成为更深入了解miRNA与肝癌发生发展的关系提供了新线索，并为肝癌治疗寻找潜在分子靶点提供了新的思路和依据。