基于“毒损髓脉”探讨补肾生血解毒法调控再生障碍性贫血T细胞免疫应答网络的作用机制

The imbalance of T cell immune response network in hematopoietic microenvironment is the key pathological mechanism of immune response disorder and hematopoietic function of bone marrow suppression in aplastic anemia (AA). It has become a key therapeutic target which recovers the dynamic balance of T cell immune response network and proliferation and differentiation of hemopoietic stem cells (HSCs) in AA therapeutic research. We use the bone marrow suppression AA mice model induced by immunologic reaction as the research subject, study the molecular mechanism of inhibiting the abnormal immune response of T lymphocyte, interfering in the expression of related cytokines, recovering the dynamic balance of T cell immune response network in AA mice treated by Bushen Shengxue jiedu Recipe. We well detect the expression of the key cytokines in Fas/FasL apoptosis signal transduction pathway for inhibition of apoptosis in HSCs and the regulation function on Jak/stat and PRK/eIF2 signal transduction pathway which inhibition the cell cyclying and protein synthesis. We study on the molecular mechanism of restoring dynamic balance of the T cell immune response network, regulating the proliferation and differentiation of HSCs, recovering the steady-state in bone marrow hematopoietic environment and reconstructing the hematopoietic function of bone marrow. We want to investigate the pathogenesis pathological microscopic features of the interpretation for the pathogenesis theory "Poison damage bone marrow and Kidney essence could not converse to blood" and the multi-link, multi-level, multi-target therapeutic features and advantages of the TCM therapy for AA.

造血微环境中T细胞免疫应答网络失衡是再生障碍性贫血（AA）免疫应答失调、骨髓造血功能抑制的关键病理机制，恢复造血微环境中T细胞免疫应答网络的动态平衡和造血干细胞（HSCs）增殖和分化，是治疗AA研究的关键作用靶点。我们在临床有效的基础上，以免疫介导致骨髓抑制AA小鼠模型为研究对象，研究补肾生血解毒方抑制异常的T细胞免疫应答反应，干预相关细胞因子的表达，恢复T细胞免疫应答网络动态平衡；检测其干预Fas/FasL凋亡信号传导关键细胞因子的表达，抑制HSCs细胞凋亡；调控Jak/stat和PRK/eIF2信号通路抑制细胞周期性分裂和蛋白合成的作用，研究补肾生血解毒方恢复T细胞免疫应答网络的动态平衡、调控HSCs的增殖与分化、恢复骨髓造血内环境的稳态、重建和修复骨髓造血功能的作用机制，探讨"毒损髓脉、精不化血"病机的病理学微观特征和中药复方治疗AA的多环节、多层次、多靶点的效应机制。

我们提出中医药治疗再生障碍性贫血（AA）要遵循“恢复骨髓造血微环境中T细胞免疫应答网络的动态平衡和造血干细胞（HSCs）正常增殖和分化”的原则，以“补肾填精、生血解毒”为治疗原则，通过“补肾填精”恢复HSCs的增殖和分化，“生血解毒”调控骨髓造血微环境中T细胞免疫应答网络的动态平衡、恢复骨髓造血微环境的稳态，达到治疗目的。研究结果显示，补肾生血解毒方可以调控淋巴细胞以及T细胞亚群的比率，从整体上恢复被打破的T细胞免疫应答网络的平衡，同时在局部可以抑制骨髓微环境中异常活跃的免疫反应，阻止局部炎性细胞因子的表达，降低免疫攻击引起的骨髓细胞凋亡，从而改善造血干细胞的增殖和分化，修复骨髓造血功能，达到治疗AA的目的。进一步研究发现，补肾生血解毒方中生血解毒组分（当归补血汤加黄连）可以有效降低效应T细胞的增殖和分化，修复Treg细胞介导的免疫抑制功能，并且能够通过干预SLAM-SAP的结合以及Fyn和T-bet的表达与分布，从而降低IFNγ在骨髓微环境中的含量，抑制Fas/FasL介导的凋亡，可以有效缓解通过免疫介导的造血干细胞损伤，恢复造血微环境免疫应答动态平衡，修复造血干细胞的增殖和分化。通过研究T细胞免疫应答网络失调、HSCs凋亡和增生抑制与骨髓造血机能障碍病理改变的关联性及其在骨髓抑制致造血功能障碍的作用机制和中医药效用的优势靶点，为“毒损髓脉、精不化血”病机理论在中医药治疗AA临床应用上奠定客观的实验依据和应用基础，证实了“恢复骨髓造血微环境中T细胞免疫应答网络的动态平衡和HSCs的增殖和分化是治疗AA的关键所在”的科学假说。补肾生血解毒法是以中医学气、血、毒理论为指导的AA治疗法则，此研究成果可以为深入研究中医学气、血、毒理论与自身免疫应答反应相关性，探讨中医学气、血、毒理论的客观物质基础，提供科学客观的实验基础，丰富传统中医理论的科学内涵，为中医药防治自身免疫性疾病的研究提供可供参考的研究思路和方法。