核酸适体的筛选机理及快速筛选方法研究

核酸适体（aptamer）是一类能够与特定靶标分子相结合的单链DNA或RNA，是一种功能性的高分子，类似抗体。适体的广泛应用与适体筛选技术的相对落后必将推动筛选机理和快速筛选方法的研究。.本课题将通过多种定量技术手段，重点阐述2-3个关键因素对筛选成功率.的影响，并建立一种快速的适体筛选方法。拟通过Nanoorange蛋白定量试剂盒研究靶标浓度对筛选效率的影响；通过FRET方法研究pool内分子间的相互作用以及不同变性方法对pool分子折叠的影响；结合微流分离、毛细管电泳和温度梯度洗脱技术建立高效的筛选方法。并尝试多种其它的筛选方法，利用Q-PCR技术对成熟筛选技术各个步骤进行定量追踪，研究pool分子分配和富集的过程，深入理解筛选机理。.对于筛选机理的深入认识才可能从根本上推动筛选技术的进步，解决适体应用的瓶颈问题。最终推动适体在各个领域的广泛应用。

本研究课题聚焦于适配体（aptamer）的筛选技术（SELEX），着力探讨筛选机理并致力于建立快速高效的筛选方法。通过大量的探索、各种失败与成功实验的分析和相互验证，找出了筛选成败的几个关键因素。这几个关键因素是：1、所采用的筛选方法分离效率的高低；2、PCR扩增及污染的控制；3、子文库的制备质量。我们建立了基于超微量磁珠的快速筛选方法、基于表面等离子共振芯片直接洗脱的SPR-SELEX、常规的CE-SELEX和基于分段收集的FCE-SELEX技术。在此过程中，我们对复杂模板的PCR扩增也有了不同于文献报道的新认识。这些将为今后进一步发展SELEX技术，开发更稳定和更高通量的筛选技术奠定了坚实的理论基础，为产业化提供了必要条件。