自噬在慢性乙型肝炎进程中的作用及相关机制研究

Hepatitis B is severe infectious diseases in China. Chronic infection by HBV can lead to severe liver diseases. Autophagy is a regulated process that can be involved in the elimination of intracellular microorganisms and in antigen presentation. Some literatures reported autophgy play an important role in HBV replication and pathogenesis, but changes of autophagic response in patients with chronic HBV infection is not clear. Our study will aim at various types of HBV infected people, evaluating the autophagic process in the liver and PBMC of HBV infected person by established and being established study cohort. Clarify the regular pattern of autophagic variation in patients with HBV infection. Study autophagy phenomenon in patients with chronic HBV infection on the level of gene to explore the role of autophagy in the pathogenesis of chronic hepatitis B virus infection, and the combination of clinical and epidemiological field survey data, comprehensive assessment of autophagy in the development of chronic hepatitis B virus infection.Supplement the pathogenesis of chronic hepatitis B, and provid an important theoretical basis to find new therapeutic targets.

乙型肝炎是我国的重大传染病，其最大危害是感染慢性化。细胞自噬是新近发现的机体固有免疫防御机制之一。文献报道乙肝病毒的复制和致病性受到自噬作用的影响，但目前几乎所有的相关研究均是在体外细胞水平研究HBV感染与自噬的关系，对于自噬在HBV慢性感染者机体内究竟是以何种方式来影响其发病进程的，至今尚不清楚。本课题拟以各类HBV感染者为研究对象，通过已经和即将建立的研究队列，从体内肝细胞和外周血单核细胞两方面着手，阐明自噬在HBV感染者机体内的变化规律，在基因水平研究慢性乙肝患者机体内的自噬现象，探讨自噬在乙肝病毒慢性感染发病中的作用，并结合临床和流行病学现场调查资料，全面评估自噬在乙肝病毒慢性感染发生发展中的影响，进一步丰富慢性乙肝的发病机制，并为寻找新的治疗靶点提供重要的理论依据。

本项目以各类HBV感染者为研究对象，通过已经和即将建立的研究队列，从体内肝细胞和外周血单核细胞两方面着手，阐明自噬在HBV感染者机体内的变化规律。在基因水平研究慢性乙肝患者机体内的自噬现象，探讨自噬在乙肝病毒慢性感染发病中的作用。主要结果有：① 完成收集HBV慢性感染者65例，HBV急性感染者18例，同时期内住院治疗的40例非乙肝患者，HBV无症状携带者40例。② 完成肝细胞内Beclinl、LC3的表达检测。Beclin 1和LC3在慢性乙肝患者，急性乙肝患者，HBV无症状携带者以及正常的肝组织中均有表达。急性和慢性乙肝患者肝组织中Beclin 1和LC3蛋白阳性表达率显著高于HBV无症状携带者和正常的肝组织。HBV无症状携带者肝组织中Beclin 1和LC3蛋白阳性表达率和正常肝组织无显著差异。Beclin 1 与 LC3 在慢性乙型肝炎肝细胞中表达呈正相关，其相关性具有统计学意义。③ 完成PBMC中自噬相关基因Beclin—I、微管相关蛋白一1轻链3(MAPLC3)mRNA的表达水平检测。Beclin1 mRNA和LC3 mRNA在慢性乙肝患者，急性乙肝患者，HBV无症状携带者以及正常人的PBMC中均有不同程度的表达。Beclin1 mRNA在PBMC中的阳性率分别为60.0%(39/65)、 55.5%(10/18)、 43.3%(13/30)、40%(16/40)； 相对表达量分别为(0.762±0.035)、(0.708±0.172)、(0.405±0.146)和 (0.327±0.119)。LC3 mRNA在PBMC中的阳性率分别为56.9%(37/65)、 50.0%(9/18)、 36.7%(11/30)、35.0%(14/40)； 相对表达量分别为(0.892±0.073)、(0.675±0.482)、(0.459±0.330)和 (0.371±0.257)。Beclin1 mRNA和LC3 mRNA在急性和慢性乙肝患者PBMC中的阳性率及相对表达量均明显高于HBV无症状携带者和正常的PBMC，差异有统计学意义。④完成肝细胞内自噬泡的透射电镜检测。慢性乙肝组细胞阳性率80%，急性乙肝组细胞阳性率100％；无症状携带组细胞阳性率40％；正常肝细胞组细胞阳性率20％。慢性乙肝组，急性乙肝组与正常肝细胞组阳性率比较差异均有统计学意义；无症状携带组与正常