分级孔结构氧化硅整体柱固定化酶及催化制备新型凝油剂

To improve the activity and stability of the lipase, hierarchical meso/macroporous silica monolith will be used to immobilize lipase in this project. The silica monolith will be obtained through a concentrated reverse emulsion method-High Internal Phase Emulsion (HIPE). A novel oil gelling agent for phase selective gelation of oils will be synthesized in this project by using monolith immobilized lipase. More specifically: (1) the preparation, modification and control of the silica monolith will be investigated; (2) the lipase will be immobilized on the silica monolith and the immobilization process will be optimized. Additionally, the relationship between the microenvironment and the catalytic property will be studied. The immobilized lipase with improved activity will be designed rationally; (3) two kinds of bioreactors will be constructed and utilized for synthesis of the oil gelling agent, whereas the kinetics of the catalytic process will be investigated. The method of enzyme immobilization and the bioreactor system developed in this project can be utilized in other value-added products, which will provide novel theoretical basis and technical support for the rational design of immobilized enzyme and the construction of bioreactor system. Furthermore, the synthesis of oil gelling agent will be a promising approach for the containment and treatment of oil spills.

为提高固定化酶的活性和稳定性，使其更好地适应非天然催化环境，提出高内相比乳液模板法（HIPE法）制备分级孔结构氧化硅整体柱固定化酶的思路；为缓解日趋严重的油污污染问题，提出酶促合成新型凝油剂，实现泄漏油污回收的思路。项目着重考察：（1）整体柱的制备、修饰和调控过程，探索整体柱微结构随制备条件及修饰方法等因素的变化规律,揭示不同微结构整体柱的合成机制，创制新结构高性能整体柱材料；（2）调控并优化整体柱固定化酶的过程，并考察其催化特性，探索微环境-酶催化特性间的关系，实现高性能固定化酶的可控制备；（3）设计构建整体搅拌式和连续柱式反应器系统，进行过程优化和动力学研究，实现新型凝油剂的高效制备。本项目开发的固定化酶方法和构建的反应器系统还可应用于其它产品的酶促制备过程，将为固定化酶及反应器的理性设计及构建提供理论基础和技术支持。另外，新型凝油剂的合成对解决海洋油污污染问题具有重要意义。

为提高固定化酶的活性和稳定性，使其更好地适应非天然催化环境，本项目提出了制备整体柱固定化酶的思路，利用高内相比乳液模板法和硬模板法制备了大孔介孔氧化硅和陶瓷材料整体柱。利用后嫁接法修饰整体柱，并利用共价键将脂肪酶分子固定于整体柱上，优化了固定化酶的制备条件，研究了固定化酶的催化性能及稳定性。结果发现，氨基修饰的整体柱Amino-PCM的酶蛋白负载量为5.7 mg/g，固定化酶Lipase@Amino-PCM的比酶活可达12.3 U/g；环氧基修饰的载体Epoxy-PM的酶蛋白负载量为6.4 mg/g，固定化酶Lipase@Epoxy-PCM的比酶活可达15.7 U/g。Lipase@Amino-PCM和Lipase@Epoxy-PCM在水相和有机相中均表现出良好的热稳定性。并初步探索了微环境-酶催化特性间的关系，实现高性能固定化酶的可控制备。为缓解日趋严重的油污污染问题，提出了利用固定化脂肪酶催化合成新型凝油剂，实现泄漏油污回收的思路。利用固定化脂肪酶催化甘露醇和脂肪酸乙烯酯转酯反应，成功制备出五种不同侧链长度的凝油剂Man-6、 Man-8、 Man-10、 Man-12 和 Man-14，且这些凝油剂的凝油效果良好。Man-8在有水存在的环境中仍可达到较理想的凝油效果，90%的油相可被回收。固定化酶 Lipase@Amino-PCM 、Lipase@Epoxy-PCM和Lipase@PDA-PCM（仿生粘合法修饰整体柱固定化酶）催化制备凝油剂Man-8时的最终产率分别为78%、80%和80%，并表现出了较理想的重复使用性能。将这些固定化酶用于构建反应器，也可成功制备凝油剂。本项目开发的固定化酶方法和构建的反应器系统将为固定化酶及反应器的理性设计及构建提供理论基础和技术支持。另外，新型凝油剂的合成对解决海洋油污污染问题具有重要意义。