新型卵巢癌相关抗原CA166-9的生物学功能及作用机制研究

We have recently cloned a new ovarian cancer associated antigen, which is specifically identified by COC166-9 monoclonal antibody against ovarian cancer. The preliminary bioinformatics and biological functions experiments revealed that CA166-9 is a human immunoglobulin-like molecula.Migration and invasion activities were evident in CA166-9 positive ovarian cancer cells and cells treated with the antigen,while COC166-9 monoclonal antibody could inhibit the migration and invasion in CA166-9 positive ovarian cancer cells.It was demonstrated that CA166-9 was an independent potential diagnostic and prognostic marker for ovarian cancer and might play an important role in ovarian cancer carcinogenesis and development. Based upon the above fundamental work, we would like to further systematically study the biological functions of CA166-9 both in vitro, in order to explore its biological functions in vivo,its molecular mechanisms and its feasibility as a vaccine for preventing or treating ovarian cancer in mounse models bearing ovarian cancer with normal immune system in later research.

CA166-9 是我们新近克隆获得的、由我中心研制的卵巢癌单克隆抗体COC166-9 特异识别的抗原。生物信息学和生物学功能等初步研究发现该抗原为人免疫球蛋白样分子，阳性表达该抗原的卵巢癌细胞，具有显著的迁移性与侵袭性，而抗CA166-9 抗体可明显抑制该种癌细胞的迁移与侵袭，并发现该抗原是判断卵巢癌病人预后的独立危险因素，提示CA166-9 在卵巢癌发生发展中起重要作用。本项目拟在上述工作的基础上，在体外系统对CA166-9 的生物学功能进行研究；为后续进一步进行体内生物学功能研究、相关机制（如CA166-9 的相互作用蛋白、相关信号通路及活性调控等）及探讨其在小鼠体内作为疫苗预防和治疗卵巢癌的可行性提供理论基础。

CA166-9是北京大学人民医院妇科肿瘤研究中心自主研发的卵巢癌单克隆抗体COC166-9特异识别的抗原分子。该抗原在上皮性卵巢癌中表达率约为80%，正常成人组织及卵巢良性肿瘤中罕见表达。通过前期的实验研究及生物信息学挖掘发现该抗原为人免疫球蛋白gamma-1重链恒定区（IGHG1），命名为CA166-9。阳性表达CA166-9的卵巢癌细胞具有较强的迁移及侵袭能力，且该抗原的阳性表达是判断卵巢癌病人预后的独立因素，提示CA166-9可能在卵巢癌的发生发展中发挥重要作用。研究通过siRNA基因干扰、构建CA166-9质粒转染等基因转入的方法转染不同的卵巢癌细胞，分别降低和升高CA166-9表达水平，研究其对卵巢癌细胞恶性表型如细胞增殖、凋亡，细胞迁移、侵袭能力，细胞周期以及细胞克隆形成能力的影响。同时体外表达CA166-9蛋白，分别用该蛋白处理CA166-9低表达细胞，并用单克隆抗体COC166-9处理CA166-9高表达卵巢癌细胞，进一步探究其对卵巢癌细胞恶性表型的影响。通过MTS实验测定细胞增殖能力发现CA166-9对卵巢癌细胞系的增殖无显著影响，降低或升高CA166-9表达水平细胞增殖能力无明显差异（P>0.05）。克隆形成实验发现降低CA166-9表达可促进细胞克隆形成（P<0.01），而升高CA166-9表达水平可以抑制细胞克隆形成（P<0.05）。通过Annexin V/PI染色运用流式细胞仪检测CA166-9低表达和过表达卵巢癌细胞的凋亡率，细胞早期凋亡率及总凋亡率均无统计学差异（P>0.05）。Transwell小室细胞迁移及侵袭实验发现过表达CA166-9可促进细胞的迁移及侵袭能力（P<0.001），而干扰CA166-9表达后细胞的迁移及侵袭能力明显降低（P<0.05）。外源性加入体外表达的CA166-9蛋白可以促进CA166-9表达阴性的卵巢癌细胞的迁移及侵袭能力，但对细胞增殖能力无明显影响。综上所述，CA166-9可能通过促进卵巢癌细胞迁移及侵袭能力影响肿瘤细胞的运动，从而促进卵巢癌细胞的转移扩散。