珠子参总苷通过PI3K/Akt/mTOR通路调控滑膜自噬抗RA的分子机制研究

Rheumatoid arthritis (RA) is an incurable disease, which is mainly characterized by sustained inflamed hyperplastic synovial. Recent studies have shown that the inhibition of the autophagy induced by the activation of PI3K/Akt/mTOR signaling pathway, is a key factor of RA inflamed hyperplastic synovial. Thus, promoting the autophagy through inhibiting PI3K/Akt/mTOR signaling pathway will be a new strategy to curve RA. We have demonstrated the anti-RA activity of total glycosides from Rhizoma Panacis Majoris (RPMTG). And further studies showed that RPMTG could inhibit the proliferation of TNF-α induced RA fibroblast-like synoviocyte (RA-FLS) by promoting the autophagy. Therefore, In this study, we will investigate whether the anti-RA activity of RPMTG is achieved through stimulating the autophagy by regulating PI3K/Akt/mTOR pathway. Two parts will be included: (1) the mechanisms of RPMTG on the proliferation, apoptosis, inflammatory cytokine secretion, autophagy and PI3K/Akt/mTOR signaling in TNF-α stimulated RA-FLS inflammation and proliferation model; (2) the effect of RPMTG on the level of synovial pathology, inflammation, autophagy and PI3K/Akt/mTOR signaling pathway with in vivo arthritis model. The achievement of this project will preliminary reveal the molecular mechanism of the treatment of RA by RPMTG and provide a scientific basis for the clinical application of RPMTG.

类风湿关节炎（RA）是一种以滑膜炎性增生为主要病理特征的临床难治疾病。近来研究指出PI3K/Akt/mTOR通路活化从而抑制滑膜自噬，是导致滑膜炎性增生的关键原因，因而抑制PI3K/Akt/mTOR通路促进自噬可成为治疗RA的新策略。申请人前期研究发现珠子参总苷具有显著的抗大鼠佐剂性关节炎活性，并在细胞水平能促进自噬从而抑制TNF-α诱导的滑膜细胞(RA-FLS)炎性增殖。因此，本研究拟深入探讨珠子参总苷是否通过PI3K/Akt/mTOR通路促进自噬实现抗RA的作用：(1)考察其对TNF-α诱导的MH7A/原代RA-FLS增殖、凋亡、炎性因子分泌、自噬及PI3K/Akt/mTOR通路的调控机制；(2)检测其对在体关节炎模型滑膜组织病理形态、炎性水平、自噬及PI3K/Akt/mTOR通路各指标的作用。本项目预期可初步揭示珠子参总苷调控自噬抗RA的分子机制，为珠子参的中医临床应用提供科学依据。

类风湿性关节炎（RA）是一种累及周围关节为主的炎症性自身免疫疾病，致残率极高，被称为“不死的癌症”，临床治疗主要以抑制RA炎症、保护软骨及延缓骨破坏等为主。近年来研究发现滑膜炎性增生是RA的主要病理机制，而滑膜自噬水平失调是导致RA滑膜持续滑膜炎性增生的关键原因。因此，本课题以珠子参为研究对象，在前期课题对其物质成分深入研究的基础上，从细胞水平到动物水平，评价其调控自噬干预滑膜炎性增生的作用。. 本项目选用两种经典的体外人成纤维样滑膜细胞模型，通过检测凋亡、自噬等指标，研究珠子参总苷调控自噬抑制滑膜细胞炎性增生的作用，进而应用AIA大鼠关节炎模型，在体内水平研究珠子参总苷对关节炎病理、滑膜炎性的相关干预作用。. 在本研究中我们发现了珠子参总苷调控自噬抑制滑膜炎性增生的作用，主要研究结果为：（1）珠子参总苷可以显著抑制滑膜细胞RA-FLS和MH7A的增殖，呈现出剂量依赖和时间依赖；并且通过调控MAPK通路诱导滑膜细胞发生线粒体途径介导的凋亡，阻滞细胞周期；（2）珠子参总苷可以通过PI3K/Akt/mTOR通路抑制RA-FLS和MH7A细胞的自噬水平；（3）珠子参总苷对AIA大鼠体重、踝关节肿胀及病理水平具有显著的改善作用，提示珠子参总苷对关节炎大鼠具有一定的治疗作用。. 总之，本研究初步揭示了珠子参总苷通过PI3K/Akt/mTOR通路调控滑膜自噬抑制滑膜炎性增生的作用，且对AIA大鼠关节炎模型具有显著的改善作用。本研究的初步研究结果提示自噬调控可以作为治疗RA药物发现的新目标，而珠子参总苷对滑膜自噬的调控作用为其临床治疗RA提供了新的理论参考。