N-乙酰葡糖胺基转移酶Ⅳ在小鼠肝癌细胞N-聚糖分枝合成中的作用与淋巴道转移潜能研究

N-乙酰葡糖胺基转移酶GnTⅣa参与N-聚糖分枝 (又称天线) 的合成，但在肿瘤转移中的作用不明。本研究将在无淋巴道转移力的小鼠肝癌Hepa1-6细胞和高转移株HcaF细胞中，通过cDNA稳定转染和RNA干扰，分别上调和下调GnTⅣa的表达，观察（1）CD147和整合素α5β1等细胞黏附分子的N-聚糖分枝合成的变化；（2）该变化对CD147诱导基质金属蛋白酶的活性、整合素α5β1介导的信号传导途径等的影响；对小鼠肝癌细胞在体内外黏附、侵袭能力以及淋巴道转移潜能的影响；（3）构建分泌型的野生型、糖基化位点突变型CD147胞外结构域融合蛋白表达载体，表达纯化分泌的野生型和糖基化位点突变型CD147胞外结构域融合蛋白，利用质谱分析确证CD147上N-聚糖分枝结构变化，旨在揭示GnTⅣa在N-聚糖分枝合成调控的核心地位以及对肿瘤淋巴道转移的作用，为肿瘤淋巴道转移的早期诊断和治疗提供新靶点分子。

本研究在无淋巴道转移力的小鼠肝癌Hepa1-6细胞和高转移株HcaF细胞中，通过cDNA稳定转染和慢病毒介导的RNA干扰，成功上调和下调GnTⅣa的表达。发现：GnTⅣa 表达变化能够引起小鼠肝癌细胞中N-聚糖分支结构明显改变，且GnTⅣa的过表达在体内外均能明显提高 Hepa1-6 迁移和转化潜能；相反，下调 GnTⅣa 的表达则抑制肿瘤细胞的迁移和转化能力，提示GnTⅣa 表达可能与肝癌的转移有关。进一步发现，GnTⅣa 表达变化引起CD147由低糖型和高糖型的相互转变，CD147糖蛋白表面的N-聚糖发生明显改变。推断：CD147可能是GnTⅣa下游靶分子糖蛋白之一。此外，本研究结果提示肝癌细胞内可能存在不同GnTs 的相互调节或相互作用关系，有待于进一步深入研究。本研究还初步探讨了GnTV在膀胱尿路上皮癌中表达的临床意义。为进一步研究GnTs在肿瘤中的作用奠定了实验基础。