IL-21/IRF4信号通路促进调节性B细胞活化增殖在胃癌免疫逃逸中的作用机制研究

Some suppressive cells involved in tumor immune escape. A new subset of B lymphocyte,regulatory B lymphocyte cell(Breg),plays a powerful immunosuppressive effects in immune regulation through the secretion of IL-10. However, Breg has not been reported in tumors yet. We found increased Breg in gastric carcinoma and Breg takes part in the progression of gastric cancer, but the mechanism is unknown. The recent study reported that IL-21 may be involved in the activation and proliferation of Breg. Besides, IRF4 involved in IL-10 generation.We Hypothesized that: increased IL-21 in gastric cancer promotes regulatory B cell activation and proliferation through IRF4 signaling pathway, Breg plays suppressive effects by secreting IL-10 , involved in immune escape of gastric cancer.To achieve this,the study intends to use coculture in vitro to explore the role IL-21 in the activation and proliferation of Breg, to research IRF4 signaling pathway in the activation and proliferation of Breg promoted by IL-21 using of siRNA technology , to explore the suppression of Breg in the development of gastric cancer under mouse models.In multi-levels including the molecular, the cellular and the mouse model, to further explore the IL-21/IRF4 signal pathway in the activation and proliferation of Breg, to research the role of Breg in the gastric immune escape , providing a new theoretical basis for the research of tumor immune escape.

免疫抑制性细胞参与了肿瘤的免疫逃逸。B淋巴细胞的新亚群-调节性B细胞(Breg)通过分泌IL-10在免疫调节中发挥抑制功能，但Breg在肿瘤中尚未见报道。我们研究发现Breg在胃癌中表达增多，参与胃癌进展，但其增高的机制不明。最新研究发现IL-21可能参与了Breg的活化增殖,而IRF4与IL-10产生相关。故提出假设：胃癌患者中增高的IL-21通过IRF4信号通路，促进了调节性B细胞的活化增殖、IL-10的分泌，参与了胃癌的免疫逃逸。为此，本研究拟采用体外刺激共培养探讨IL-21在Breg的活化增殖中的作用，利用siRNA等技术研究IRF4信号通路在IL-21促进Breg活化增殖中的作用，以动物模型探讨活化的Breg细胞在胃癌发生发展中的作用。从分子、细胞及动物整体多水平深入研究Breg活化增殖相关的信号通路，探讨Breg在胃癌免疫逃逸中的作用，为肿瘤免疫逃逸的研究提供新的理论依据。

背景：免疫调节在胃癌发生发展及转移中发挥重要作用。近来，研究发现一群具有调节作用的B淋巴亚群——称为调节性B淋巴细胞（regulatory B cells，Breg）。Breg在自身免疫性疾病中的研究已经取得了初步研究结果，但是Breg在胃癌中的作用并不清楚。.目标：本研究以原发性胃癌（gastric cancer，GC）为研究对象，检测调节性B淋巴细胞（Breg）在胃癌中的百分比变化，探讨其在胃癌中的表面标志特性，研究Breg细胞在胃癌中可能的作用及相关机制，为调节性B淋巴细胞在胃癌及人类肿瘤甚至其在其他疾病中的研究提供研究基础。研究中统计分析采用GraphPad Prism 5.0软件分析。.主要结果：(1)多色FCM分析发现CD19+CD24hiCD38hiBreg细胞分泌大量IL-10，以此作为胃癌中Breg的表面特征，用于后续的功能研究。(2)统计分析发现，GC外周血中Breg百分比显著高于HC(P<0.001)，统计分析发现Breg百分比随着TNM 分期的增加而有增高的趋势，但两组间并无统计学差异(P>0.05)。(3)FCM分析发现GC外周血Th1低于健康对照组(P<0.01)，Th2在HC和GC之间无统计学差异， GC外周血Treg明显高于HC(P<0.01)。(4)Breg与T细胞(R=0.3917, P<0.05)、Tc细胞(R=0.5100，P<0.01)、Treg(R=0.4252，P<0.01)具有直线相关性。(5)研究发现Breg对CD4+Th分泌细胞因子IFN-γ和TNF-a均具有抑制作用(P<0.01)。(6)研究发现Breg可以诱导CD4+CD25-效应性T细胞表达FoxP3水平显著增高(P<0.01)，中和实验证实此过程中依赖TGF-β。.结论：胃癌外周血中Breg的增高，而且随着TNM分期增加存在着增高的趋势，提示Breg可能与肿瘤的发展相关。Breg可以抑制Th细胞因子的分泌，而且同时以TGF-β依赖的途径诱导Treg细胞的增多，Breg可能打破了机体的抗肿瘤免疫，参与了胃癌的免疫逃逸，参与了胃癌的发生发展和转移。考虑到Breg在肿瘤中可能发挥的抑制肿瘤的效应，特异性去除或减少胃癌患者体内的Breg的水平，或许可以提高机体的抗肿瘤免疫应答，提高肿瘤的免疫治疗效果。