雌激素激活血管内皮细胞Ezrin蛋白在乳腺癌血管新生及转移中的作用和机制研究

estrogen had been found as an important hormone that promote breast cancer metastasis. hower,its mechanisms have largely been unkown.the traditional view point out the roles of estrogen enhance breast cancer cell migration and invasion may account for it.recently research on tumor metastasis have found that tumor microenviroment play key role in tumor metastasis.and tumor vascular is an important factor in it.previously,we had found that estrogen have its roles in promoting vascular endothelial cell proliferation. moreover, estrogen promote breast cancer cell migration via activation meberance skeleton associted protein ezrin. base on these works,we hypothesis that:estrogen may promote breast cacner angiogenesis via activation vascular endothelial cell ezrin protein.this may be an important mechanism of estrogen promote breast cancer metastasis.thus,in this work we plan to study :1、ascertain the role of estrogen promote breast cancer angiogenesis.2、observe the role of estrogen on vascular endothelial cell migration and tube formation.investigate the role of ezrin in it.3、investigate the molecular mechanism of estrogen activation ezrin.4、through silence ezrin expression observe the effects of ezrin in estrogen promote breast cancer angiogenesis and metastasis.this research would reveal a new mechanism of estrogen promote breast cancer metastasis and found that ezrin play an important role in it.our study may provide a new molecular target for controling breast cancer metastasis.

雌激素是促发乳腺癌转移的重要因素，传统观点认为其机制在于雌激素增强乳腺癌细胞迁移和侵袭能力上。最新研究表明肿瘤微环境是调控肿瘤转移的重要因素，而肿瘤血管是肿瘤微环境的重要组成。我室前期工作证实：雌激素具有促血管内皮增殖的效应，同时发现Ezrin是介导雌激素促乳腺癌细胞迁移的关键蛋白。结合文献报道Ezrin在血管内皮上高表达，我们推断：雌激素通过激活内皮Ezrin蛋白，引发乳腺癌血管新生，这可能是其促乳腺癌转移的重要机制。为证实以上假说，本项目拟建立卵巢切除乳腺癌细胞荷瘤裸鼠模型，采用免疫组化等方法首先明确雌激素促乳腺癌血管新生的作用；进一步采用体内外血管新生模型、免疫印记等方法观察雌激素对血管内皮迁移的影响，研究Ezrin蛋白在其中的作用，探讨雌激素促乳腺癌血管新生的分子机制，本项目将从新的角度揭示雌激素促乳腺癌转移的机制，确认Ezrin是其中的关键分子，为控制乳腺癌转移提供新的分子靶点。

乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤，根据雌激素受体ER表达的情况分为三种类型：ERα（+）乳腺癌、HER-2过表达的ERα（-）乳腺癌及三阴性乳腺癌（TNBC），其中TNBC占乳腺癌类型15%-20%，恶性程度高且易发生复发及转移。肿瘤转移过程复杂：肿瘤原位生长并局部浸润，血管新生，癌细胞渗入血管在循环系统存活，移出血管，形成转移灶。其中肿瘤血管新生为肿瘤的转移提供了充足的血行通道，并为癌细胞扩散提供一定的驱动力，是肿瘤转移的关键步骤。故本项目围绕雌激素（E2）对乳腺癌转移的作用机制方面展开如下研究：1、明确E2促ERα（+）乳腺癌细胞迁移作用后，我室进一步观察OHT对ERα（+）乳腺癌细胞株MCF-7迁移的影响并探讨其机制，研究发现OHT结合GPR30激活Src蛋白，进而磷酸化激活ezrin，介导细胞骨架重构并促进MCF-7细胞迁移；2、明确E2和OHT对ERα（+）乳腺癌作用后，我室以ERα（-）乳腺癌细胞SK-BR-3、MDA-MB-231为研究对象，探讨GPR30在E2激活ezrin促进细胞迁移侵袭中的作用，结果显示E2分别通过GPR30/ERK1/2、PI3K/AKT与ERβ/AKT促进SK-BR-3、MDA-MB-231细胞迁移和侵袭，在MDA-MB-231细胞中，ERβ相对高表达、GPR30相对低表达，同时激活两种受体，ERβ表达下调，且GPR30可拮抗ERβ介导的促细胞迁移和侵袭的作用; 3、我室围绕GPR30在乳腺癌血管新生过程中的作用继续展开研究，通过体内构建去势乳腺癌荷瘤裸鼠模型检测内皮细胞表面标记物CD34、MVD及VEGF的表达情况，结果显示，与对照组相比，E2处理组的血管新生程度被抑制；体外以TNBC细胞MDA-MB-468和MDA-MB-436为研究对象，给予E2和G1激动GPR30，引起VEGF基因和蛋白水平表达下调，抑制体外内皮细胞管腔形成。本项目揭示了GPR30在E2作用不同类型乳腺癌细胞迁移侵袭以及肿瘤血管新生方面的重要作用，进一步补充了对乳腺癌转移机制的认识，以GPR30及ERβ表达比例为切入点，探讨受体之间功能拮抗在乳腺癌进展中的作用，为临床上阴性乳腺癌病理分型的进一步细化提供新的具有临床意义的实验依据，为乳腺癌诊断以及转移的预后和提前干预的针对性药物作用靶点提供新的思路。