桩蛋白在角膜新生血管形成中的作用和机制研究

眼部炎症、感染、外伤、变性等多种疾病可诱发角膜新生血管形成，严重影响视力甚至致盲。大量研究显示血管内皮生长因子A（VEGF-A ）在新生血管形成中起着重要作用。本课题组的前期研究发现VEGF-A诱导的桩蛋白（Paxillin）激活参与调控人脐静脉内皮细胞的运动和侵袭能力。本研究拟应用分子生物学技术在体外培养的人脐静脉内皮细胞中进一步研究Paxillin酪氨酸位点Y31和Y118磷酸化对下游通路的影响及其在VEGF-A诱导的细胞运动和侵袭中所起的作用，并在小鼠角膜新生血管模型中进一步验证Paxillin表达和磷酸化对VEGF-A诱导的角膜新生血管形成的调控作用，为明确角膜新生血管的发生机制及寻求新的治疗方法提供理论依据。

通过体外实验，发现VEGF-A能调高paxillin在HUVEC中的磷酸化水平，paxillin靶向siRNA在体外能特异性及有效地抑制HUVEC中paxillin mRNA及蛋白的表达，可用于后续的基因功能研究。Paxillin可抑制VEGF-A诱导的HUVEC细胞粘附和增殖、细胞运动和体外血管形成的能力。小鼠体内实验发现： 在植入VEGF-A缓释剂颗粒后，角膜新生血管呈阶段线性生长，在血管形成过程中，PXN-pY31、PXN-pY118在角膜组织中的表达随时间呈曲线形表达， 在血管形成过程中，PXN-pY31、PXN-pY118表达水平与新生血管呈正相关。Gen对于小鼠角膜微囊袋模型的CNV 有明显的抑制作用，Gen能降低paxillin在CNV中的磷酸化水平，Gen靶向在体外能特异性及有效地抑制CNV中paxillin mRNA及蛋白的表达。