MYCT1在急性髓细胞白血病中的调控机制及功能的研究

Recently much work is focused on the important role of c-Myc and its targets in aute myeloid leukemogenesis. The novel c-Myc target MYCT1 is a candidate tumor suppressor gene cloned from normal human blood by our team. The promoter methylation might be the reason for its low expression levels in tumor tissues. MYCT1 existed in various tumor tissues but the mechanism and function of MYCT1 in aute myeloid leukemogenesis has not been reported yet. The mouse c-Myc target Myct1 which cloned from murine myeloid cells shared a higher homology with MYCT1 and its activation by c-Myc and RUNX1-ETO plays an important role in AML development. Our previously study demonstrated that MYCT1 was down-regulated in bone marrow mononuclear cells of AML patients without respect to FAB classification. Thus, we concluded that the gene mutations or promoter methylation may contribute to the downregulation of MYCT1 in AML patients. In this work, we will use mouse models, AML patient specimens and cell lines to explorer the relationship between the expression levels, mutations and aberrant methylation of MYCT1 and clinical characteristics in AML and further study the regulatory mechanism between c-Myc and MYCT1, which will provide us a novel AML diagnostic and therapeutic target for the future study.

c-Myc及其靶基因在急性髄细胞白血病（AML）的发生、发展中发挥重要作用，已成为白血病研究的热点。MYCT1是我们前期克隆的c-Myc新的靶基因，在多种肿瘤中均低表达，但其在AML的表达和功能无相关报道。研究表明MYCT1启动子区c-Myc结合位点的甲基化可能是造成其在肿瘤中低表达的主要机制。鼠Myct1是由鼠骨髓细胞克隆的c-Myc靶基因，与MYCT1高度同源，可被c-Myc和RUNX1-ETO激活，参与了AML的发生发展，我们推测人MYCT1可能发挥相似作用。前期研究结果显示MYCT1在AML中低表达，且与AML的FAB分型无关。因此我们推测其低表达与AML患者MYCT1的突变和启动子的异常甲基化有关。在本研究中，我们将通过白血病移植鼠模型对这一假设进行深入研究，并丰富c-Myc对MYCT1的特异性调控理论，以期明确MYCT1在AML发生发展中的作用机制，为白血病的诊治提供新靶点。

白血病(Leukemia)是一类造血干细胞的恶性克隆性疾病。其发病的主要原因是克隆中的白血病细胞增殖失控、凋亡受阻、分化障碍，而使细胞停滞在发育的不同阶段。MYCT1（Myc target 1）为我课题组前期克隆的候选肿瘤抑制基因，被认为是c-Myc的靶基因，在多种肿瘤中低表达，但其在白血病中的表达和生物学功能尚无相关报道。本研究首次探讨了MYCT1在急性髓细胞白血病发生发展中的作用机制，分别从体内和体外实验对MYCT1在急性髓细胞白血病中的表达情况、甲基化状态及其对白血病细胞生物学功能的影响进行了深入研究。结果显示，MYCT1在急性髓细胞白血病患者骨髓细胞中低表达，其启动子区的甲基化率显著高于无病对照组；慢病毒表达载体稳定转染细胞株HL-60-MYCT1和KG1-a-MYCT1的建立，从体外证实了MYCT1的过表达能显著抑制HL-60和KG1-a细胞的增殖，阻滞HL-60和KG1-a细胞的细胞周期在S期，且能显著抑制细胞周期蛋白Cyclin D1和Cyclin E的表达，促使发生早期凋亡的HL-60和KG1-a细胞显著增加，并促进凋亡蛋白BAX、Cleaved-Caspase-3和Cleaved-Caspase-9的表达，抑制抗凋亡蛋白BCL-2的表达；免疫缺陷鼠白血病移植瘤模型的建立从体内证实了上述结论。以上研究结果表明MYCT1可能通过抑制细胞周期相关蛋白Cyclin D1和Cyclin E的表达来抑制急髓白血病细胞的增殖，从而将细胞周期阻滞在S期，促使细胞分裂增殖减慢、凋亡加速，发挥了肿瘤抑制基因的功能，而MYCT1启动子区的高甲基化可能是抑制其在急性髓细胞白血病中发挥肿瘤抑制基因功能的主要原因。