家蝇抗菌肽基因的高通量筛选及表达模式研究

家蝇血淋巴内抗菌物质对细菌、真菌、原虫、病毒及肿瘤细胞等具有生物活性，日益受到人们的关注。加强家蝇抗菌肽的基因结构与表达模式研究，有望揭示其在家蝇免疫防御中所起的作用，为充分开发家蝇药用价值打下基础。本项目拟采用基因芯片技术对家蝇抗菌肽基因进行高通量筛选，依据Genbank上公布的家蝇近源昆虫抗菌肽基因的编码区保守序列设计寡核苷酸探针，采用自动化微量点阵器将人工合成的探针打点制备芯片，与已标记处理的家蝇幼虫（经过细菌免疫诱导）全长cDNA文库进行杂交，杂交信号经激光共聚焦扫描仪分析后，采用低盐高温高严谨洗脱阳性杂交体。洗脱物转染大肠杆菌进行扩增，并作克隆和序列分析。在此基础上，以获取的家蝇抗菌肽基因的cDNA为模板设计PCR引物和合成RNA探针，取诱导和未诱导的家蝇幼虫进行半定量RT-PCR和组织切片原位杂交试验，对家蝇抗菌肽基因在体内时相和空间分布的表达模式进行分析研究。