固氮类芽孢杆菌中固氮酶基因nifH的启动子类型和转录活性分析

固氮微生物的固氮效率与固氮基因的表达调节有关。固氮芽孢杆菌是一类抗逆力强和存活期长的革兰氏阳性（G+）细菌，作为生物肥料具有巨大应用价值，但其固氮调节机理的研究国内外尚未见报道。从我室鉴定和定名的固氮类芽孢杆菌新种Paenibacillus sabinae中克隆出3个固氮酶基因nifH，启动子软件分析表明nifH1和nifH3启动子是σ54型，nifH2启动子是σ70型；而革兰氏阴性(G-)固氮菌如肺炎克氏杆菌和根瘤菌等中的固氮基因启动子均是σ54型，其转录严格依赖于激活蛋白NifA。本研究拟开展固氮类芽孢杆菌nifH启动子转录活性分析。主要研究内容：1）通过RT-PCR确定3个nifH原位转录水平；2）nifH2-σ70型启动子活性研究；3）nifH1-σ54型和nifH3-σ54启动子活性分析；4）凝胶阻滞试验确定启动子类型。结果将初步揭示G+和G-固氮菌在固氮调节机理方面的异同。