CD4+CD28-T淋巴细胞与胸膜间皮细胞相互作用在结核性胸膜炎中的机制研究

CD4+CD28-T lymphocyts can proliferate and mediate damage of tissues during chronic inflammatory reaction; Pleural mesothelial cells mediate inflammatory reaction via interaction with other immunocytes; TLRs participate the immunity against tuberculosis and have the ability to accommodate T cells. Our previous studies showed that stimulation with BCG can enhance the expression of TLR2,TLR4,MCP-1,TGF-β and CX3CL1 on pleural mesothelial cells. Therefor, we presume that the interaction between CD4+CD28-T lymphocyts and pleural mesothelial cells play a role in the mechanism of tuberculous pleurisy. We plan to detect the concentration, filtration and phenotype of CD4+CD28-T lymphocyts in tuberculous pleurisy in purpose of confirming that CD4+CD28-T lymphocyts play a role in tuberculous pleurisy. Then we plan to detect the interaction between CD4+CD28-T lymphocyts and pleural mesothelial cells via co-culture technique and analyze the mechanism by the method of blocking cytokines and TLR in vivo and vitro.

体内慢性持续性抗原刺激可导致CD4+CD28-T淋巴细胞的显著增殖，并介导组织器官的免疫损伤；胸膜间皮细胞活化后能释放多种细胞因子，与其他炎症细胞相互作用引起炎症反应；TLR参与机体抗结核免疫且对于T细胞具有调节作用。我们的前期研究发现，胸膜间皮细胞受到卡介苗刺激之后TLR2、TLR4、MCP-1、TGF-β及CX3CL1的表达增加，推测胸膜间皮细胞与CD4+CD28-T淋巴细胞通过相互作用参与结核性胸膜炎的免疫机制过程。本项目拟深入探讨结核性胸膜炎中间皮细胞与CD4+CD28-T淋巴细胞的相互作用及其机制。首先检测CD4+CD28-T淋巴细胞在病灶中的侵润、表达及其生物学特性，明确CD4+CD28-T淋巴细胞与结核性胸膜炎的相关性。然后通过CD4+CD28-T淋巴细胞与间皮细胞共培养及体内外细胞因子、TLR阻断实验，研究CD4+CD28-T淋巴细胞与胸膜间皮细胞的相互作用并探讨其可能机制

本项目检测结核性胸膜炎患者胸腔积液及外周血中CD4+CD28-T淋巴细胞、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）和转化生长因子-β1（TGF-β1）的表达水平，结果显示结核性胸膜炎组胸腔积液中CD4+CD28-T淋巴细胞百分比明显高于非结核性胸膜炎组。其外周血中CD4+CD28-T淋巴细胞百分比分别高于非结核性胸膜炎组和正常对照组。胸腔积液中，相比于恶性组、漏出液组和脓胸组，结核组中MCP-1、TGF-β1浓度均升高且CD4+CD28-T淋巴细胞百分比分别与MCP-1、TGF-β1浓度呈正相关。胸腔积液中，联合检测胸腔积液中MCP-1和TGF-β1浓度对结核性胸腔积液的最佳诊断临界值为1520.58 pg/ml，ROC曲线下面积79.3 %，敏感度89.3 %，特异性80.6 %。提示CD4+CD28-T淋巴细胞的比例变化可能影响结核性胸膜炎的发生发展，在其中可能扮演重要的免疫调节角色；胸腔积液中，联合检测胸腔积液中MCP-1和TGF-β1浓度对结核性胸腔积液有重要的临床诊断鉴别价值。.在上皮细胞损伤机制的研究方面，用TLR2抗体和TLR4拮抗剂分别与BCG共刺激上皮细胞，结果显示BCG刺激上皮细胞可诱导TLR2、TLR4、TGF-β-1和CX3CL1表达上调，TLR2抗体和TLR4拮抗剂可部分抑制BCG引起的TGF-β-1和CX3CL1表达上调。提示TLR2和TLR4介导的信号通路在结核分枝杆菌致上皮细胞损伤中发挥重要作用。.在Toll样受体与结核性胸膜炎相关性研究方面，探讨TLR4基因Asp299Gly、Thr399Ile位点多态性与肺结核及结核性胸膜炎的相关性。采用错配聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析及PCR-直接测序法检测TLR4基因Asp299Gly位点和Thr399Ile位点在结核、结核性胸膜炎患者患者及健康人群中的突变频率,并对实验结果进行统计分析。结果显示在结核组、结核性胸膜炎组和正常对照组中均未发现TLR4基因Asp299Gly位点和Thr399Ile位点的突变。提示TLR4基因Asp299Gly位点和Thr399Ile位点多态性与肺结核及结核性胸膜炎的遗传易感性无关。