在体外模拟体内生理环境下应用脉络宁防治挤压伤综合征的实验研究

Crush injury syndrome is one of the major causes of death in the accident ,earthquake and other trauma. Treatment of traditional Chinese Medicine for the crush syndrome is to promote blood circulation to improve blood stasis while the western medication commonly used fluid infusion,antishock and hemodialysis to prevent acute kidney injury.However toxic substances released from a severe injured limb often caused acute renal failure and a heavy harmness on circulatory system that will threaten the patient life.Therefore the overall treatment effect is poor, leading to a high rate of amputation and mortality. In order to prevent crush injury syndrome, previous studies using blood perfusion in vitro to mimic physiological environment system for severe limb crush injury was proved to have the capacity to reduce large amount of toxins produced during crush injury.Data showed that the method is better than the renal replacement therapy, but the mechanism remains unclear.Basic research confirmed that the mitochondrial induced internal apoptosis involved in the pathogenesis of rhabdomyolysis during Crush injury syndrome. Present study will further use Mailuoning injection and blood perfusion in the system instead of blood perfusion only.A mitochondrial protection mechanism will be studied with the application of Mailuoning which we thought can more effectively prevent the occurrence of crush syndrome .This research should provide a theoretical basis for the prevention of crush syndrome.

挤压伤综合征是车祸、地震及其他创伤中的重要死因之一。中医临床上治疗方法是活血化瘀、解毒泄浊。而在西医上多为补液、抗休克及防止急性肾损伤所采用的血液透析法等。但是严重挤压伤肢体的毒害物质常造成急性肾衰或影响循环系统从而威胁生命，且治疗未从根本上阻断肢体毒素入血，因而整体治疗效果均不理想。课题组前期研究从预防挤压伤综合征角度出发，应用体外模拟体内生理环境系统对严重挤压伤肢体进行血液灌注，该方法提前排除了挤压伤后肢体产生的大量毒素，且证实该方法优于肾脏替代治疗，但其机制有待进一步研究。基础研究已经证实线粒体相关的凋亡途径参与了挤压伤综合征中横纹肌溶解的发病机制，并可能发挥了至关重要的作用。本次课题我们将进一步利用该系统在单纯血液灌注基础上加入化瘀解毒中药脉络宁注射液，从线粒体损伤机制上验证在体外模拟体内生理环境下应用脉络宁能更有效防止挤压伤综合征的发生，为临床防治挤压伤综合征提供理论依据。

挤压伤综合征是车祸、地震及其他创伤中的死因之一。课题组前期研究应用体外模拟体内生理环境系统对严重挤压伤肢体进行血液灌注，提前排除了挤压伤后肢体产生的大量毒素，预防了挤压伤综合征的发生，并发现线粒体相关的凋亡途径参与了挤压伤综合征中横纹肌溶解的发病机制。. 本次课题在此基础上，通过对挤压伤模型中肢体毁损严重程度的形态学评估，应用肉眼“4C”观察、光镜、电镜等形态病理学及肌肉不可逆损伤后肌肉组织标本中的Caspase9、Bax、Bcl-2、TNF-a的蛋白表达水平，完成了对骨骼肌发生完全不可逆损伤标准制定；通过对比临床的肾脏替代治疗方法（血液透析）、局部灌注肢体的方法治疗方法、用体外模拟体内生理环境系统在灌注血液中加入脉络宁局部灌注肢体的方法，得出脉络宁局部灌注肢体的方法更有效地使血清中代谢毒素如肌酸激酶(CK)、血肌肝(Scr)、血钾(K+)、肌红蛋白(Mb)、尿素氮(BUN)、白介素-6（IL-6）、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）的浓度降低且应用组织的病理学观察，该方法降低了挤压伤综合征中肾损伤的程度；采用westernblot的方法分别检测骨骼肌胞浆和线粒体组分内Cyto C，AIF，caspase 3，Smac 的变化情况，得出脉络宁注射液通过稳定肌细胞线粒体而产生肌肉保护作用；研究中还发现远端缺血处理可能起到了抑制“动脉不足”现象的作用，从而抑制IL-1β和TNF-α表达，进而抑制凋亡通路的开放，与持续血液灌注相比，远端缺血处理灌注方法对骨骼肌的缺血再灌注损伤具有显著的保护作用。. 该项研究从线粒体损伤机制上验证在体外模拟体内生理环境下应用脉络宁能更有效防止挤压伤综合征的发生，但后续研究需要通过横纹肌原代培养的方法建立横纹肌溶解模型，采用线粒体膜通透性转运孔开放检测试剂盒，使用共聚焦显微镜和流式检测的方法检测线粒体膜孔变化，进一步在细胞分子水平阐述脉络宁对线粒体的保护作用机制，同时临床应用发现体外模拟体内生理坏境系统加压灌注脉络宁可以有效治疗下肢慢性缺血病变，改善肢体血液循环，对于重建肢体血管微循环有重要意义。