Hint1多靶点抑制肝纤维化的分子机制研究

TGF-β1和HSC及肝纤维化的关系已经明确，而对beta-连环蛋白(β-catenin)和HOC在以TGF-β1 活化HSC为核心的正反馈系统中和在肝纤维化发展中的作用及其机制知之甚少。申请者发现大鼠纤维化肝组织高表达β-catenin以及β-catenin协同TGF-β1/Smad3活化HSC.同时,最新研究显示Hint1能强力抑制TGF-β1和β-catenin两条信号通路。申请者以基于慢病毒载体制备的过表达载体(Len-Hint1)为技术方法抑制TGF-β1和β-catenin两条信号通路，研究Hint1对HSC和HOC活化的影响,阐明Hint1在肝纤维化发展中的作用及其分子机制，为肝纤维化的防治提供新的理论基础和治疗手段。

肝纤维化的核心机制是肝星状细胞(HSC)的活化，而转化生长因子β(TGF-β)通过其下游的Smad等促进HSC活化、增殖，从而在肝纤维化的进程中发挥了关键作用。目前抑制肝纤维化方面的研究多局限于对TGF-β信号通路的干预。 Wnt/β-catenin通路是一条进化保守的细胞信号通路，在胚胎的发育、成体组织的稳态维持方面起重要作用，越来越多的研究表明Wnt/β-catenin信号通路的异常激活与器官纤维化的发生、发展密切相关，其中包括肝纤维化。三联组氨酸核苷结合蛋白1（Hint1），是新近发现的肿瘤抑制因子，研究表明Hint1能在转录水平抑制Wnt/β-catenin信号通路。. 我们前期的研究发现大鼠肝纤维化组织高表达β-catenin以及β-catenin协同TGF-β1/Smad3活化HSC。由于慢病毒具有可长期稳定表达所携带的外源基因的优势,故本研究采用慢病毒为载体，构建含Hint1基因全长的质粒(len- Hint1)，将其导入细胞和动物体内，结果显示Hint1可以抑制重组Wnt3a和TGF-β1对HSC的活化，在体内及体外实验中均可以抑制Wnt/β-catenin和TGF-β/Smad通路相关基因的mRNA及蛋白水平的表达。同时利用基因工程的原理制备重组Hint1蛋白，动物实验发现重组Hint1蛋白同样具有抑制肝纤维进展的作用。. 以上一系列研究初步探索了Hint1多靶点抑制肝纤维化的作用及其分子机制，为深入研究肝纤维化的防治提供新的理论基础。