遗传修饰构建粘液瘤病毒/MSCs载体靶向胆囊癌治疗的实验研究

胆囊癌发病逐年递增，其疗效的提高有待新技术手段。粘液瘤病毒有着高度种属特异性，其特异性杀伤人体肿瘤细胞的作用机制与效能明显不同于以往腺病毒治疗；课题组前期实验首次发现野生型粘液瘤病毒对胆囊癌细胞有特异的溶瘤杀伤作用，而对正常胆囊细胞增殖无明显影响，作用机制尚不明确，且单一的瘤内注射方式将严重影响胆囊癌溶瘤治疗；本项目通过体外研究粘液瘤病毒对胆囊癌细胞的作用，探讨其可能的调控机制，评价不同抑制基因表达手段对病毒复制可能造成的影响；采用不同遗传修饰调控AKT磷酸化水平控制粘液瘤病毒复制，外源抑制细胞内内源干扰素对病毒的清除，以构建可稳定荷载并传送粘液瘤病毒的骨髓间充质干细胞载运体系；通过建立不同荷瘤动物模型，利用骨髓间充质干细胞肿瘤回巢性特性，动态观察骨髓间充质干细胞荷载粘液瘤病毒靶向传送并靶向杀伤胆囊癌细胞的作用；以期为胆囊癌治疗提供一种高效、低毒的新方法并为其临床应用奠定理论与实验基础。

本研究通过western blot，免疫组化等分子生物学技术，构建胆囊癌细胞荷瘤鼠模型，在体外和体内实验中发现：(1) 粘液瘤病毒可以在体外感染和杀伤胆囊癌细胞。(2) 雷帕霉素通过提高磷酸化Akt的表达，增强粘液瘤病毒体外抗肿瘤细胞能力，但对裸鼠中成瘤的肿瘤杀伤作用有限。(3) 胆囊癌肿瘤组织中富有IV型胶原，能够抑制粘液瘤病毒的扩散，减弱病毒的杀伤作用。(4) 透明质烷（Hyaluronan, HA）通过提高p-Akt及促进细胞分泌MMP-9提高粘液瘤病毒在肿瘤组织中的感染、增殖及扩散能力，从而促进病毒的抗肿瘤作用。(5) 间充质干细胞（Mesenchymal cell, Msc）搭载粘液瘤病毒可以趋向性迁移到肿瘤组织中，从而提高粘液瘤病毒的感染效率。上述结果发现了促进粘液瘤病毒抑制胆囊癌的各种手段，并探究其中的机制，为应用溶瘤病毒治疗胆囊癌提供了实验基础。