腺苷受体A2b对少突胶质前体细胞发育和存活的调控及机制

Oligodendrocyte precursor cell (OPC) differentiating into oligodendrocytes(OL) is very important to the formation of myelination.Adenosine receptors(AR) play important roles in the development and survival of OPC after injury. Activation of A1ARs stimulated OPC migration. Activation of A2aAR is noxious to OL after cerebral ischaemia. The results of our preliminary experiment showed that A2bAR mRNA is gradually decreased with OPC differentiation and maturation, suggesting that it be possible of A2bAR taking important roles during the development of OPC. So, after we investigate the effects of inflammation and hypoxia on the expression of A2bAR in OPC, we shall investigate the effects and mechanism of A2bAR on proliferation, differentiation of OPC, the effects and mechanism of A2bAR on survival of OPC damaged by inflammation and hypoxia in the culture of OPC cells. and we shall investigate the effects of A2bAR on the formation of myelination in the immature mouse cerebral matter injury model, using A2bAR transfection, the medium of inflammation and hypoxia as inducing condition, with the technical method including morphological-staining, molecular biology, conditional A2bAR gene knock out mouse model etc. This study will offer very important significance for the therapy of disease about demyelination and for further recognition of the role of A2bAR in nervous system disease.

少突胶质前体细胞(OPC)分化为少突胶质细胞(OL)是髓鞘形成的重要环节。腺苷受体(AR)在OPC的发育和存活中发挥着重要的作用，其中A1AR的激活能促进OPC的迁移，A2aAR在脑缺血后的激活能增加OL的毒性损伤作用。我们的前期实验发现A2bAR随着OPC的分化、成熟逐渐降低，揭示A2bAR可能在OPC的增殖、分化和存活中发挥着极重要的作用。本课题拟利用形态学、细胞分子生物学、基因敲除等技术，以体外培养的OPC和脑白质缺氧损伤幼鼠为研究对象，以A2bAR转染、缺氧、炎性介质为诱导条件，在研究缺氧和炎性介质对OPC上A2bAR表达调控的基础上，进一步探讨A2bAR对OPC增殖、分化的影响及机制，探讨A2bAR对缺氧和炎症损伤后OPC存活的影响及机制，以及在体观察脑缺氧损伤后A2bAR对脑白质内髓鞘形成的影响，这将对治疗脱髓鞘相关疾病以及进一步认识A2bR在神经系统疾病中的作用有重要意义。

少突胶质前体细胞(OPC)分化为少突胶质细胞(OL)是髓鞘形成的重要环节。腺苷受体(AR)有四种亚型，在OPC的发育和存活中发挥着重要的作用，OPC上的A2bAR的功能并不清楚。我们的实验发现A2bAR随着OPC的分化、成熟逐渐降低，揭示A2bAR可能在OPC的增殖、分化和存活中发挥着极重要的作用。A2bAR是一种低表达量受体，目前被认为在正常生理情况下并不发挥作用。本课题组以体外培养的OPC为研究对象，用携带A2bAR的慢病毒感染、低氧、细菌脂多糖三种方法均能诱导OPC上的A2bAR表达上调，且低氧能促使OPC上的A2bAR的表达部位发生转移，HIF/PKC信号通路参与低氧诱导A2bAR表达上调过程。在体外培养的OPC被低氧干预的基础上，添加A2bAR的特异性阻断剂PSB603 2或4天后发现OPC的形态出现明显的变化，细胞活性出现明显的降低。用BrdU掺入实验和细胞周期蛋白P21、P27、CDC2的分子生物学实验进一步证明低氧条件下A2bAR并不能调控OPC的增殖。用OPC不同分化阶段标记物NG2/Oligo-2、CNPase、MBP/MOG的免疫组织化学实验和western-blot实验证明低氧条件下A2bAR也不能调控OPC的分化。用流失细胞、western-blot、TUNEL三种技术方法证明低氧条件下A2bAR能够调控OPC的凋亡，PKC/Ca2+参与调控，PKA信号通路未参与其调控。体内实验在选择性敲除OPC上A2bAR的基础上制作脑缺血缺氧幼鼠模型，然后检测脑白质的变化。目前已经完成NG2工具小鼠和A2bARflox/flox基因敲除小鼠杂合子和纯合子的制备和繁殖，目前正在进行NG2工具小鼠和A2bARflox/flox基因敲除小鼠纯合子的杂交和幼鼠的鉴定，待其繁殖到需要的小鼠数量和后续的一些检测还需要3-4月完成。