梓醇对少突胶质细胞前体细胞增殖分化的作用机制研究

少突胶质细胞前体细胞(OPC)是中枢神经系统成体干细胞的一种，其增殖分化是髓鞘再生的关键，在多发性硬化(MS)神经功能损伤修复过程中具有重要作用。本研究探讨地黄主要活性成分梓醇对OPC增殖分化作用的影响，利用动物实验与细胞培养技术观察OPC在体与离体的增殖与分化情况。动物实验注射不同剂量梓醇进行干预，通过免疫荧光双标技术观察Olig1/BrdU与Olig2/BrdU表达情况，LFB染色观察髓鞘脱失，Bielschowsky银染观察轴索变化；在细胞培养中加入不同浓度的梓醇(1, 10, 100μmoloL-1)，以相差显微镜、扫描电镜及免疫荧光、免疫组化方法观察细胞生长形态及Olig2的表达情况，PDGFR-α检测OPC成熟状态，探讨梓醇对OPC的增殖与分化的影响。从组织、细胞、分子水平阐述梓醇对OPC的增殖与分化的作用机制，为梓醇/地黄治疗MS提供实验数据和科学依据。

项目背景：少突胶质细胞前体细胞是中枢神经系统成体干细胞的一种，其增值分化是髓鞘再生的关键。在多发性硬化神经功能损伤修复过程中具有重要作用。而实验性脑脊髓膜炎小鼠是多发性硬化的一种理想模型。.主要研究内容：本研究探讨地黄主要活性成分梓醇对少突胶质细胞前体细胞增值分化的影响，利用动物实验与细胞培养技术观察少突胶质细胞前体细胞在体与离体的增值分化情况。动物实验中，注射不同剂量梓醇进行干预，通过免疫荧光双标技术观察Olig1/BrdU与Olig2/BrdU表达情况，LFB染色观察髓鞘脱失，Bielschowsky银染观察轴索变化；在细胞培养中加入不同浓度的梓醇，以相差显微镜、扫描电镜及免疫荧光、免疫组化方法观察细胞生长形态及Olig2的表达情况，PDGFR-α检测OPC成熟状态，探讨梓醇对OPC的增殖与分化的影响。从组织、细胞、分子水平阐述梓醇对OPC的增殖与分化的作用机制，为梓醇治疗MS提供实验数据和科学依据。.重要结果及关键数据：梓醇可以有效的促进少突胶质细胞前体细胞在体及离体的增值与分化。在体实验显示，梓醇可以有效的减少炎细胞浸润，髓鞘脱失及损伤，免疫荧光双标显示，Olig2/BrdU双标细胞数量明显升高，RealTime rt-PCR示Olig1、Olig2基因表达量明显升高，结合免疫组化提示梓醇可以促进髓鞘损伤修复。细胞实验显示，梓醇在一定浓度可以较好地促进少突胶质细胞前体细胞增值与分化，并且在一定程度促进分化的少突胶质细胞的生长。.科学意义：多发性硬化缓解期常规治疗存在一定的局限性，主要使用免疫调节及免疫抑制治疗，常用药物包括硫唑嘌呤、麦考酚酸莫酯，利妥昔单抗等疗法，虽然治疗方法及药物较多，但是疗效尚存一定的局限性且价格昂贵，同时存在严重的毒副作用，限制了缓解期药物在MS患者中的长期使用，给国家和社会带来了极大经济负担。而中医药在抑制炎症反应、改善神经功能缺损，促进神经功能修复方面具有明显作用。本实验进而证实了中药地黄提取物-梓醇可以有效的抑制多发性硬化模型的炎性浸润，促进髓鞘再生及修复，具有较高的临床及科研价值。