α-硫辛酸协同角化细胞生长因子保护高氧肺损伤机制的研究

支气管肺发育不良（BPD）是早产儿最常见的呼吸系统并发症，其死亡率高、并发症多且预后差，已成为新生儿重症医学中最为棘手的问题之一。氧疗使不成熟肺组织长时间暴露于高浓度氧所致肺损伤是BPD发生发展的主要诱因之一。角化细胞生长因子（KGF）具有肺泡Ⅱ型上皮细胞（AECⅡ）保护作用，但高氧暴露后产生氧化应激反应导致AECⅡ丧失对KGF的反应从而走向凋亡。探究KGF抵抗的发生机制，对抗氧化应激，恢复KGF对AECⅡ的保护作用成为防治高氧肺损伤的关键。本项目拟建立早产大鼠高氧肺损伤动物和细胞模型，采用肺组织形态测定分析，Western-blot，Real-time PCR，流式细胞术，激光共聚焦，SiRNA，质粒转染，免疫荧光和电镜等技术探讨AECⅡ发生KGF抵抗的分子机制，以及α-硫辛酸如何消除这一抵抗，恢复KGF的细胞保护作用。为早期有效防治高氧肺损伤奠定理论基础，并为BPD的研究提供新靶点。

支气管肺发育不良（BPD）是早产儿最常见的呼吸系统并发症，其死亡率高、并发症多且预后差，已成为新生儿重症医学中最为棘手的问题之一。氧中毒是BPD重要的致病因素之一，不成熟的肺组织暴露于高氧环境中，导致细胞内氧化应激水平显著升高，当超过机体的抗氧化系统防御能力时，引起氧化应激损伤。研究表明，KGF对哺乳动物呼吸系统的发育、肺泡上皮细胞的增殖分化十分重要，急性肺损伤/急性呼吸窘迫等病理状态下，KGF的合成分泌受到抑制，因此，此时补充一定量的外源性的KGF可能会发挥保护作用。在本研究中我们观察到KGF能够在常氧、短时间高氧情况下促进肺泡II型上皮细胞（ATIICs）的增殖、抑制凋亡，但延长的高氧暴露，导致细胞内氧化应激水平明显升高，细胞对KGF敏感性降低，抑制KGF保护效应引起KGF抵抗；进一步的研究表明，高氧暴露导致ATIICs内氧化应激水平显著升高，氧化应激一方面通过激活p53- HDAC1- H4通路抑制KGFR转录翻译，另一方面通过增加受体蛋白泛素化引起细胞内受体降解，引起KGF受体蛋白（KGFR）表达水平下调，进而出现高氧环境下KGF抵抗现象；通过基因沉默手段，我们也观察到KGFR受体基因沉默的细胞，高氧环境下凋亡及坏死显著，补充外源性KGF无法发挥其保护作用；抗氧化剂α-LA能够有效清除高氧暴露导致的细胞内过多氧自由基，降低细胞内氧化应激水平，同时抑制p-p53(ser 392)的活化，进一步抑制p-p53-HDAC1-H4途径，保护KGFR免受高氧损伤，另外，α-LA还可以提高ATIICs细胞的总体抗氧化能力，增强细胞抵抗力。因此，联合使用KGF和α-LA能最大可能的保护ATIICs免受高氧损伤。本研究为高氧肺损伤和BPD预防治疗提供了新思路。