比格犬雌激素β受体剪切异构体ERβ419、ERβ431在雌激素反应信号中的作用机理研究

Beagle is internationally recognized as a universal canine ，However, The populations cultivation reproductive rates is decline now,Induction of estrus and estrus synchronization technology is an important method to improve the reproductive rate of the Beagle, which technology is carried out based estrogen response signal.Estrogen by acting on its receptors play a role of estrogen receptor existing systems, but one of the estrogen receptor β is reported fewer, especially for Beagles.Our group has got two new estrogen receptor β shear isomers ER419, ER431, but its specific mechanism of action is unclear.This study by the Real-time PCR, immunoprecipitation、ligand binding assay、immunofluorescence、bioinformatics. To reveal estrogen receptor β function of shear isomers, predict and verify that interact with protein, explicitly interact binding region, as well as the interaction of the protein on the transcriptional activity and protein expression of estrogen receptor β shear isomers. To reveal the mechanism of ERβ419 and ERβ431 of Beagles play a reproductive role. Provided the experimental basis and theoretical reference for further study of the reproductive physiology to improve the efficiency of the production of the Beagles .

比格犬是国际上公认的通用实验犬，但目前种群培育中出现了繁殖率下降的现象，诱导发情和同期发情技术是提高比格犬繁殖率的重要方法，而这些技术可以通过作用于雌激素反应信号实现，雌激素通过作用于其受体发挥作用，目前对雌激素受体已有系统研究，但对其中的雌激素β受体报道较少，尤其是对于比格犬，本课题组已获得两种新雌激素β受体异构体ERβ419和ERβ431，但其具体的作用机制尚不清楚。本研究拟通过Real-time PCR，免疫共沉淀，配体结合实验，免疫荧光，生物信息学等，来明确ERβ419和ERβ431与雌激素的作用方式，预测并验证与其发生相互作用的蛋白，明确它们发生相互作用的结合区域，以及相互作用蛋白对ERβ419和ERβ431转录活性与蛋白表达的影响。以期揭示比格犬ERβ419和ERβ431在雌激素反应信号中的作用机制。为进一步研究比格犬的生殖生理、提高比格犬的生产效率提供理论参考。

摘要：雌激素通过细胞内特定雌激素受体（ERS）介导的信号通路来调节机体生殖生理活动。被介导的信号通路分为两种不同类型，通常被称为基因组和非基因组通路。基于此，本研究以比格犬ERβ以及课题组前期成功得到的2个剪切异构体ERβ419、ERβ431为基础，对比格犬雌激素β受体及其剪切异构体ERβ419、ERβ431进行慢病毒表达载体的构建以及包装、细胞系构建、目标蛋白的亚细胞定位、转录活性测定等，初步探究比格犬ERβ、ERβ419、ERβ431与雌激素的作用机理。本研究还利用Axiom Canine High-Density (HD) Genotyping Array芯片筛选比格犬不同发情周期差异表达基因以及利用iTRAQ技术筛选比格犬不同发情周期差异蛋白表达情况，明确不同发情周期基因和蛋白的表达变化情况，为进一步研究比格犬的生殖生理、提高比格犬的生产效率提供理论参考。