栉孔扇贝血细胞酚氧化酶原的分子克隆与特性研究

酚氧化酶原（prophenoloxidase, proPO）系统是贝类非特异性防御反应中免疫识别机制的重要组成部分。申请人10年来系统研究了栉孔扇贝血细胞的分类、形态、免疫特性、发生分化及其内源酶的定位、活性、病原感染的变化规律等内容，分离提纯了栉孔扇贝血细胞中的酚氧化酶（phenoloxidase, PO）。本项目拟根据提纯的PO蛋白质序列，设计特异性引物，扩增proPO的cDNA全序列。通过proPO序列：①弄清proPO在扇贝各组织以及不同类型血细胞中表达的特点；②病原感染后proPO表达的变化规律；③确定栉孔扇贝各发育期（从受精卵到稚贝期），proPO出现的时期和释放特点。用proPO序列表达蛋白，制备抗体，弄清proPO与PO蛋白的差异以及二者在血淋巴中的分布和变化规律。探讨proPO的特性及其在扇贝发生发育、病原感染中的作用，积累栉孔扇贝proPO系统的免疫防御反应的研究资料。

本青年科学基金项目（30901112）取得的成果包括：(1) 分离提纯了栉孔扇贝血细胞中的PO并研究了PO的酶学特性；(2) 测定了proPO部分肽段氨基酸序列，获得了proPO的全基因序列；(3) 研究了栉孔扇贝组织及不同类型血细胞中PO的分布特点；(4) 研究了病毒感染、细菌多糖刺激后血细胞中PO的动态变化规律；(5) 探明了栉孔扇贝各发育过程中proPO出现的时期和分布特点；(6) 研究了PO氧化产物的抗菌活性；(7) 分析比较了5种贝类的PO在酶学特性上的差异。在本领域主流SCI收录期刊发表论文6篇，一级学报论文4篇，待发表SCI收录论文3篇，申请国际发明专利1项，国家发明专利3项，获山东省研究生优秀科技创新成果一等奖1项，教育部新世纪人才称号。完成了项目研究内容预期目标，取得显著成果。