右归饮对绝经后骨质疏松症骨髓间充质干细胞影响的分子机制实验研究

This study is to observer the effection of You Gui Drink, which is used in clinical for treating postmenopausal osteoporosis.Find the molecular mechanism of it. Observe the ability of protein expression of You Gui Drink for ovarian osteoporosis in small environment. And through the BMSCs isolated from carring EGFP C57BL / 6 transgenic mice,if the drugs promot BMSCs migration, thus start, accelerate the healing process in osteoporosis area, and by increasing the growth factor receptor in the expression of BMSCs, to make BMSCs osteoblast transformation, enhance osteoporosis regional osteogenetic vigor, adjust osseous metabolism, promote the repairion of osteoporosis. Through the experiment, the thorough reveals the clinical You Gui Drink,prevention and treatment of postmenopausal osteoporosis molecular mechanism, and provide the theoretical basis, and at the same time to evaluate the efficacy, screening for and treatment of osteoporosis drug target provide effective role, with great economic and social value and broad application prospect.

摘要：本研究拟利用中药方剂"右归饮"，通过分离、培养携带EGFP转基因C57BL/6小鼠，分离出BMSCs，观察中药右归饮在去卵巢后骨质疏松症微环境中趋化因子的蛋白表达能力，及促进BMSCs迁移，从而启动、加速骨质疏松区域愈合过程，并通过增加生长因子受体在BMSCs上的表达，促使BMSCs向成骨细胞转化，增强骨质疏松区域的成骨活力，调节骨代谢，促进骨质疏松的修复。通过上述实验，深入揭示临床中药方剂补肾填精方预防及治疗绝经后骨质疏松症的分子机制，为其提供理论依据，同时为评价药效、筛选治疗骨质疏松的有效药物提供作用靶点，具有巨大的社会经济价值和广泛的应用前景。

本项目发表SCI文章1篇（IF=3.61），中文核心期刊2篇。采用小鼠双侧卵巢切除的方法建立经典骨质疏松症的动物模型，考察右归饮，盐酸雷洛昔芬及两者联合给药治疗骨质疏松及机理。. Micro-CT结果表明给药3周和7周后联合给药组较右归饮组显著增加Tb.N；与盐酸雷洛昔芬组相比，联合给药组明显增加了骨密度，BV/TV 和 Tb.N并且降低了Tb.Sp。此外，联合给药组的BV/TV、Tb.Th、Tb.N参数略高于右归饮组，而BS/BV和Tb.Sp则略低于右归饮组，但是两组间差异无统计学意义。给药5周后右归饮组的骨密度及骨形态计量指标参数与去势组有显著性差异。. 血清中生化指标表明给药3周和7周后联合给药组血清中I型胶原氨基端前肽（P1NP）水平和胶原羧基端肽（CTx）水平较假手术组和盐酸雷洛昔芬组显著增加；右归饮组和盐酸雷洛昔芬组的P1NP水平较去势组的P1NP水平均显著增加。盐酸雷洛昔芬组血清CTx水平显着低于其他各组的CTx水平。给药5周后右归饮组的CTx比去势组略高一点，而盐酸雷洛昔芬组较去势组略低一些，各组间的差异均无统计学意义。去势组血清中钙水平与假手术组间的差异有统计学意义。右归饮组钙磷水平与去势组之间的差异均无统计学意义，但盐酸雷洛昔芬组的钙、磷水平较去势组均显著降低。. 细胞增殖实验结果表明给药3、5、7周后联合给药组的间充质干细胞在整个过程中始终具有相对快速的增长；右归饮组的生长速率显着低于其他各组。细胞分化实验结果表明给药3周和7周后联合给药组的ALP / BCA高于假手术组，去势组和盐酸雷洛昔芬组。 然而，联合给药组的ALP / BCA显着低于右归饮组。给药5周后模型组ALP活性/总蛋白的数值为0.0028，盐酸雷洛昔芬组、右归饮组与模型组比较均显著升高。. 总之，右归饮与盐酸雷洛昔芬联合给药抑制小鼠的骨丢失，对骨质疏松症有治疗作用。右归饮主要是通过促进间充质干细胞分化成成骨细胞的途径抑制小鼠骨丢失；盐酸雷洛昔芬主要是通过抑制骨再吸收能力的途径抑制小鼠骨丢失，而联合和给药则主要是通过促进间充质干细胞的增殖及促进其分化成成骨细胞的途径来抑制小鼠骨丢失的。