介导TROY受体信号转导新分子的鉴定及其功能研究

髓鞘相关抑制因子在调节神经元突起生长、抑制神经再生等过程中发挥重要作用。目前对于髓鞘相关抑制因子的作用机制了解十分有限，特别是对于其共受体TROY介导的下游信号转导通路认识几近空白。 因此，从源头入手鉴定TROY下游结合蛋白并研究其功能，对深入阐明髓鞘相关抑制因子的作用机制具有重要意义。本项目拟在前期已有筛选鉴定工作的基础上，进一步分析确证候选分子特别是RhoGDI、Prohibitin、TCTP与TROY的特异结合作用，阐明其介导的生物学功能，明确其相互作用的结构基础。从而深入阐明髓鞘相关抑制因子激活的TROY信号转导通路，并可能为设计与开发促进神经再生与修复的策略开创新思路。

髓鞘相关抑制因子在调节神经元突起生长、抑制神经再生等过程中发挥重要作用。目前对于髓鞘相关抑制因子的作用机制了解十分有限，特别是对于其共受体TROY 介导的下游信号转导通路认识几近空白。本项目在前期已有筛选鉴定工作的基础上，进一步分析确证候选分子特别是RhoGDI等 与TROY 的特异结合作用，阐明其介导的生物学功能，明确其相互作用的结构基础。我们发现，RhoGDIα是TROY的一个结合分子。我们采用免疫共沉淀（Co-IP）的方法在体外培养的细胞和组织水平进一步确证了TROY与RhoGDIα的结合。缺失突变分析结果显示TROY胞内段（ICD）的234-256aa和321-350aa两段序列介导了TROY与RhoGDIα的结合。其次，在出生后的中枢神经系统的脊髓背根神经元（DRG），大脑皮层神经元以及小脑颗粒神经元(cerebellargranuleneurons，CGNs)中均检测到了TROY和RhoGDIα的共定位。第三，我们还发现Nogo-66能够增强TROY/RhoGDIα的相互作用，且TROY/RhoGDIα的相互作用是p75非依赖性的。第四，在p75基因敲除小鼠的神经元中，TROY/RhoGDIα的相互作用仍然可介导RhoA的激活。最后，在野生型和p75敲除的小脑颗粒神经元中过表达RhoGDIα能够阻断Nogo-66介导的RhoA的激活以及随后的神经突起生长抑制。我们还发现，TROY可能通过与RKIP结合，间接解除RKIP对NF-κB活性的抑制，从而激活NF-κB并促进U87瘤细胞增殖和脑胶质瘤生长。上述研究结果主要内容，发表于Journal of Neurotrauma 2011, 28:1089–1100. J Biol Chem, 2012, 287: 17503-17516. J Biol Chem 2013, 288: 34276–34286。这一研究有助于深入阐明TROY 信号转导通路，以及在神经再生修复和胶质瘤发生发展中的作用。