补体C5在沙眼衣原体引起输卵管纤维化中的作用机制

The role of C3 independent activation of complement factor C5 contributes to hydrosalpinx development in mice infected with MoPn,C5 was recently identified as a risk factor for liver fibrosis ,pulmonary Fibrosis and tubulointerstitial fibrosis, and it is may important for fibrotic processes in fallopian tube following chlamydia infection, but the mechanism remains unknown.. In this study,We induction of tube fibrosis in wild-type and C5RO mice by MoPn infetion , injecting C5KO mice with C5 or C5a proteins , injecting WT mice with C5mAB or C5aRA after MoPn infection. Cultured McCoy cells were stimulated by C5a or/and C5aRA.We detect the markers of fibrosis(Masson trichrome stain,TGFβ-1,a-SMA，FN,type I collagen ,type IV collagen,MMP-2, MMP-9,TIMP-1) .Using a combined genetic and pharmacologic approach, C5, in particular C5a, is may identified as a novel profibrotic factor in fallopian tube fibrosis following chlamydia infection and as a potential new therapeutic target.

我们新近发现了一条不依赖C3的补体C5活化途径参与了小鼠感染MoPn发病过程。C5主要与中晚期输卵管积水,阻塞发病有关，但致病机制不清楚。已有研究证实C5在肝脏，肺以及肾脏间质纤维化疾病中起到促纤维化作用。我们提出假设，C5在衣原体感染起到促进输卵管组织纤维化作用。. 本项目通过:1.体内实验建立动物模型，采用C5基因敲除小鼠感染MoPn，用C5、C5a蛋白补充C5基因敲除小鼠，用抗C5抗体、C5a受体拮抗剂干预野生型小鼠，研究干预后输卵管纤维化的改变；2.体外建立细胞实验，观察C5a和C5aR对小鼠成纤维细胞产生促纤维化因子的影响。利用遗传和药物干预手段来证实C5促进沙眼衣原体感染的输卵管纤维化作用及其可能的机制，为C5或者C5a/C5aR成为延缓和阻断输卵管纤维化新靶点提供实验依据。

沙眼衣原体生殖道感染是全世界最常见的性传播疾病。不能及时诊断和治疗会导致持续的传播并引起继发的并发症和后遗症，引起女性慢性输卵管炎、慢性盆腔炎，是女性不孕、异位妊娠的重要原因。申请人发现了一条不依赖C3的补体C5活化途径参与了衣原体感染引起的输卵管纤维化发病过程，但致病机制尚未明确。为了探究补体C5活化与输卵管纤维化的关系，以及衣原体促进C5活化的具体机制，课题组开展了以下研究，并获得了重要的实验结果。首先，课题组建立了纯化高纯度、高感染力衣原体的纯化方法，构建了衣原体荧光菌株Cm-mCherry，为本项目在后续实验中研究衣原体感染机制、构建动物模型提供良好的实验工具和可靠的保障。其次，课题组利用临床样本明确了补体C5的裂解与输卵管纤维化的关系；利用动物模型初步探究了C5裂解产物C5a、C5b-9、C5裂解产物受体C5aR1在输卵管纤维化中的作用；并通过体外实验证实了衣原体感染可通过不依赖C3的途径激活C5，并存在独特的C5裂解产物。最后，课题组发现补体调节剂甲磺酸萘莫司他可通过干扰衣原体生长周期中的复制阶段，抑制衣原体的胞内生长；利用动物模型，评估了甲磺酸萘莫司他在治疗衣原体生殖道感染中的疗效，为治疗生殖道衣原体感染提供了新思路；利用转录组学、蛋白组学分析筛选甲磺酸萘莫司他干预后的差异基因与蛋白，为寻找衣原体生长发育相关的关键蛋白提供了重要数据。