IL-17细胞因子及Th17抗原特异性淋巴细胞抗食管癌作用及机制研究

In the previous study, we found that tumor infiltrating IL-17 producing cells were detected in esophageal squamous cell carcinoma tissues. clinicopathological characteristics association analysis showed that the density of IL-17 producing cells correlated negatively with T stage (depth of primary tumor invasion). Survival analysis showed that the higher densities of tumor infiltrating IL-17+ lymphocytes were associated with better overall survival of esophageal carcinoma patients. These results indicated that IL-17+ TIL play anti-tumor immunity role in esophageal carcinoma. Furthermore, we found that there were positive correlations between levels of IL-17 producing cells and the densities of CD8+cells, as well as CD57+cells in esophageal tumor tissues. Thus, IL-17+ TIL might play anti-tumor immunity role through activating CTL and NK cells in esophageal carcinoma. In the present study, we plan to further investigate the IL-17 effects to the anti-tumor immunity of T cells, NK cells, neutrophile and dendritic cells in vitro. And using mouse model, the tumor growth inhibiton effects in vivo of IL-17 and antigen specific Th17 lymphocytes were also study. This study can help to better understand the anti-esophageal carcinoma mechanism of IL-17. This study also will establish good fundation for developing novel, effective immunotherapy methods to esophageal carcinoma in the future.

我们前期的研究发现，在食管癌的肿瘤组织中可检测到IL-17+ TIL的存在。与临床病理参数的相关性分析显示，IL-17+ TIL的数量与食管癌的T分期呈显著负相关。预后分析显示，IL-17+ TIL高数量的食管癌患者预后好，此结果初步表明了食管癌中的IL-17+ TIL具有抗肿瘤免疫作用。我们进一步的检测发现，食管癌肿瘤组织中IL-17+ TIL的数量与CD8+ CTL的数量以及CD57+ NK的数量均成正比，因此，IL-17+ TIL在食管癌中很可能是通过活化CTL以及NK细胞来发挥抗肿瘤作用。在本项目中，我们拟继续研究IL-17对于T细胞、NK细胞、中性粒细胞以及DC细胞的抗肿瘤免疫功能影响，并通过小鼠实验研究IL-17及抗原特异性Th17淋巴细胞对抑制小鼠肿瘤生长的作用，从而阐明IL-17的抗食管癌作用及机制，提供一种新的，有效的食管癌免疫治疗方法奠定基础。

食管癌是人类常见的恶性肿瘤，近年来的研究表明肿瘤微环境的免疫状态对食管癌的发生发展有重要影响。我们前期研究发现，高IL-17+TIL数量食管癌患者总生存期显著高于低IL-17+TIL数量食管癌患者，提示IL-17+ TIL在食管癌中具有抗肿瘤免疫作用。进一步的免疫组织化学技术结果显示，食管癌肿瘤组织中IL-17+ TIL的数量与CD8+ CTL的数量以及CD57+ NK的数量均成正比，因此，我们推测IL-17+ TIL在食管癌中发挥的抗肿瘤作用很可能与CTL以及NK细胞的活化有关。在本研究项目中，我们继续研究IL-17对于T细胞、NK细胞、DC细胞以及中性粒细胞的抗肿瘤免疫功能影响，并通过小鼠实验研究IL-17抑制小鼠肿瘤生长的作用，深入了解IL-17的抗肿瘤作用及机制。我们首先通过体外趋化实验检测了IL-17作用于食管癌细胞系EC109和KYSE30后能否趋化募集更多的T淋巴细胞、NK细胞、DC细胞以及中性粒细胞，发现IL-17不能直接诱导募集免疫细胞，而是通过刺激食管癌细胞分泌更多的CXCL2、CXCL3、CXCL9、CXCL10、CCL2和CCL20等趋化因子，募集更多的T淋巴细胞、NK细胞、DC细胞以及中性粒细胞，且这些免疫细胞在抗肿瘤免疫中起着重要作用。在肿瘤微环境中，免疫细胞的数量增多是一个重要的抗肿瘤作用机制，而免疫细胞功能的增强也是抗肿瘤作用重要的一方面。因此，我们进一步研究了IL-17对免疫细胞抗肿瘤活性的影响。通过IL-17对免疫细胞增殖能力、杀伤活性、表型变化以及细胞因子分泌影响的检测，发现IL-17对T淋巴细胞以及DC细胞的免疫活性没有影响，而能增强NK细胞以及中性粒细胞的抗肿瘤活性。同时，我们构建了IL-17重组慢病毒表达载体并包装重组慢病毒，感染食管癌细胞系EC109并在裸鼠体内进行成瘤实验，结果表明IL-17本身不能抑制食管癌细胞的增殖和体内的生长，但给成瘤的裸鼠尾静脉回输中性粒细胞后，过表达IL-17的肿瘤组织能招募更多的活性中性粒细胞浸润到肿瘤组织内，从而明显抑制了肿瘤的生长。我们的研究结果进一步证实了IL-17潜在的抗肿瘤作用，初步探讨了IL-17抑制食管癌作用的免疫机制，对于将来发展食管癌有效的免疫治疗方法奠定良好的实验基础。