TESTIN基因抑制胃癌细胞转移分子机制的初步研究

Our previous researches have confirmed the inhibitory effect of TESTIN in primary gastric carcinoma, and found that promoter methylation leaded to defected expression of TESTIN in most gastric carcinoma tissues. Overexpression of TESTIN gene can inhibit gastric cancer cell proliferation and colony formation, as well as inhibit the cell cycle from G1 into S phase. This gene can significantly inhibit the migration and invasion of gastric cancer cells in vitro. It could also significantly inhibit the tumorigenicity in nude mice. According to the literatures, we hypothesized that TESTIN gene may play an important role in inhibiting the metastasis of gastric carcinoma cells. Therefore in this project, we will study the molecular mechanisms of TESTIN on the inhibition of gastric cancer cell metastasis, including the detection of genes or proteins which could interact with TESTIN gene; the main signal transduction pathway may be involved in the process; the detection of TESTIN gene and its interacting gene or protein changes in the invasion and the migration process; using a mouse lung metastasis model to study the influence of TESTIN gene on metastasis of gastric cancer cells; analysis the relationship between the TESTIN and gastric cancer metastasis related parameters. We will prelimilary elucidate the molecular mechanisms of TESTIN gene on the inhibition of gastric cancer cell metastasis.

前期的研究，我们证实了TESTIN基因在原发性胃癌中起抑制作用，并发现其主要通过启动子甲基化导致在多数胃癌组织中表达缺陷；过表达TESTIN可抑制胃癌细胞增殖和克隆形成，抑制胃癌细胞由G1进入S期，能显著抑制胃癌细胞侵袭和迁移；且能显著抑制胃癌细胞在裸鼠体内生长。结合文献分析，我们发现TESTIN与促进肿瘤细胞迁移和侵袭的基因密切关联，推测TESTIN可能在抑制胃癌细胞转移中发挥重要作用，因此，本课题拟开展TESTIN抑制胃癌细胞转移分子机制研究，主要包括检测与TESTIN相互作用的基因或蛋白质；探讨其可能参与的主要信号转导通路；检测与TESTIN相互作用的基因或者蛋白质在胃癌细胞的侵袭和迁移过程中的变化；利用小鼠体内胃癌引起的肺转移模型，检测TESTIN基因对胃癌细胞转移能力的影响；临床资料分析TESTIN与胃癌转移相关参数的关系等，初步阐明TESTIN基因抑制胃癌细胞转移的分子机理。

胃癌是人类常见的恶性肿瘤，我们前期研究发现，原发性胃癌中杂合性丢失位点D7S486包含与胃癌相关的抑癌基因TESTIN，其高表达可抑制胃癌细胞的增殖和克隆形成、侵袭和迁移能力，以及在裸鼠体内的生长。因此，我们推测TESTIN基因可能在抑制胃癌细胞转移中发挥重要作用。在本项目研究中，我们继续研究与TESTIN相互作用的基因或蛋白，并探究其抑制胃癌细胞转移的分子机制。我们首先通过基因表达谱芯片、免疫共沉淀、蛋白质谱、ExPasy数据库分析等方法检测与TESTIN基因相互作用的主要基因和蛋白，结果中均检测到了ENAH（Mena）基因。我们进一步通过qPCR、免疫共沉淀、western blot和免疫荧光检测，验证了TESTIN和ENAH（Mena）之间存在相互作用。进一步的体外迁移和侵袭实验结果显示，TESTIN对胃癌细胞的迁移和侵袭起抑制作用，同时过表达Mena可进一步增强此作用，而敲降Mena则可将其逆转。因此，TESTIN对胃癌细胞迁移和侵袭的抑制作用可能主要是依赖于其与Mena的相互作用实现的。SCID小鼠肺转移模型实验结果也显示，TESTIN在体内对胃癌的转移具有抑制作用。最后，我们通过免疫组化和临床资料分析TESTIN与胃癌转移相关参数的关系，结果显示当胃癌组织中Mena高表达时，TESTIN高表达组的胃癌病人预后显著优于TESTIN低表达组，并且TESTIN的表达与淋巴结转移、肿瘤浸润、TNM分析等临床参数显著相关；而当胃癌组织中Mena低表达时，TESTIN的表达则与胃癌的临床预后、临床参数等无明显相关性。我们的研究结果进一步证实了TESTIN基因可抑制胃癌细胞的转移，初步探究了TESTIN基因抑制胃癌细胞转移的分子机制，对于提高胃癌患者的预测、加强对胃癌患者转移的监测、改善胃癌患者预后具有重要的意义。