酶导入型高灵敏DNA杂交荧光探针研究

荧光检测灵敏度低是DNA芯片等核酸荧光分析技术的主要缺点。利用聚合酶及反转录酶将染料标记的底物Dye-dNTP直接导入DNA,可望大大提高灵敏度，但受到酶对Dye-dNTP相容性差的制约。本项目改变探针分子设计思路，提出用最易转动的柔性醚键链连接dNTP-炔丙基与染料基，同时在染料分子上引入多个净负电荷。其主要功能为：①消除染料与DNA碱基疏水部位的亲和力；②增大染料与DNA链上磷酸酯阴离子间的静电排斥作用，使染料基团远离DNA主链；③醚柔性链可减弱Dye-dUTP/酶/模板在空间取向调节中的阻碍，增加酶与Dye-dUTP的有效结合，增大酶导入荧光底物的效率；④染料上多个负电荷，还可增大标记到DNA链上的染料间的静电排斥力，从根本上消除疏水性染料相互聚集而产生的荧光淬灭，从而真正做到荧光强度随染料引入量的增加而增强。项目的完成可望得到比引物标记法高1-2个数量级的荧光检测灵敏度。