针刺调控microRNAs在脑缺血大鼠神经细胞“自噬-凋亡”crosstalk中的作用机制研究

Programmed cell death directly affects the prognosis of ischemic cerebrovascular disease. Recent studies have shown that two different form of programmed cell death, autophagy and apoptosis in ischemic injury disease prognosis exist in the process of interaction, and regulated by related microRNAs on autophagy and apoptosis. Based on the discoveries, and the early stage of the research about autophagy, this topic proposed by middle cerebral artery embolism (MCAO) model in rats, using TTC staining, western blot, real-time fluorescent quantitative PCR and microRNAs antagomir \ mimic method, dynamic observation of MCAO rats infarction volume, pathomorphism changes, autophagy and apoptosis related microRNAs and each miRNA target gene expression level, and acupuncture intervention effect. We try to further explain the pathogenesis of cerebral ischemia and material base of acupuncture from autophagy and apoptosis related microRNAs and the crosstalk network of autophagy and apoptosis.

脑缺血后细胞死亡程序性调控直接影响缺血性脑血管病的预后转归。新近研究表明，程序性细胞死亡的两种不同形式（自噬、凋亡）在缺血性损伤疾病预后过程中存在交互关系，并受到“自噬-凋亡”共相关 microRNAs的调控。基于这一引起学者注目的科学新发现，以及课题组前期有关针刺诱导自噬治疗脑缺血的实验室研究证据，本课题拟采用大脑中动脉栓塞大鼠(MCAO)模型，采用 TTC染色、western blot、实时荧光定量 PCR和miRNA antagomir、miRNA mimic等方法，动态观察 MCAO大鼠病理形态学变化、“自噬-凋亡”共相关microRNAs及各microRNA的靶基因表达水平，以及针刺对上述环节的干预作用，以期从“自噬-凋亡”共相关microRNAs及其相关靶基因转录后调节自噬-凋亡crosstalk网络调控深入阐释脑缺血发生展的病理机制以及针刺水沟穴抗脑缺血损伤可能物质基础。

脑缺血后细胞死亡程序性调控直接影响缺血性脑血管病的预后转归。新近研究表明，程序性细胞死亡的两种不同形式（自噬、凋亡）在缺血性损伤疾病预后过程中存在交互关系，并受到“自噬-凋亡”共相关 microRNAs的调控。基于这一引起学者注目的科学新发现，以及课题组前期有关针刺诱导自噬治疗脑缺血的实验室研究证据，本课题拟采用大脑中动脉栓塞大鼠(MCAO)模型，采用TTC染色、高通量测序、western blot、实时荧光定量 PCR和miRNA antagomir等方法，动态观察MCAO大鼠病理形态学变化、“自噬-凋亡”共相关microRNAs及各microRNA的靶基因表达水平，以及针刺对上述环节的干预作用。.本研究关注了共相关microRNAs在凋亡和自噬相关通路中的调控作用。实验通过高通量测序检测对照组、MCAO组和电针治疗组之间差异表达的miRNAs。结果提示三组间miR-34b、miR-235和miR-275差异显著。经验证，miR-34b在MCAO组中表达明显升高，而电针水沟穴治疗则明显降低miR-34b表达。KEGG通路数据也同样提示Wnt通路可能在脑缺血损伤和电针治疗中发挥重要作用。Wnt 是miR-34b的直接靶点，miR-34b通过靶向 mRNA的3’未翻译的 237-243区域介导Wnt的转录后沉默。这就进一步证实了miR-34b/Wnt/β-catenin 通路调控作用。这一研究结果表明电针水沟穴可以通过miR-34b/Wnt/β-catenin通路干预神经细胞自噬水平来改善脑缺血预后，为阐释针刺水沟穴抗脑缺血损伤的有效作用靶点提供客观的实验依据。