卷柏中穂花杉双黄酮降糖作用机制研究

穗花杉双黄酮是本课题组前期实验从卷柏中筛选出的降糖活性成分，也是卷柏的主含成分，初步实验证明其降糖作用显著。本课题旨在从整体、细胞、蛋白质分子水平上进一步研究其降糖作用靶点和作用机制。采用胰岛素抵抗特性受体下调的HepG2肝细胞模型，研究穗花杉双黄酮对胰岛素抵抗形成过程的干预作用和形成后的治疗作用；采用糖尿病小鼠模型，免疫组化观察控制葡萄糖跨膜转运的蛋白GLUT-4分布，Western检测糖代谢关键酶类GK、PFK、PK、GS、G6Pase、PEPCK和胰岛素信号蛋白IRS-1、IRS-2、PI3K、PKB等表达，电镜观察胰腺及胰岛素应答组织超微结构的变化；比较穗花杉双黄酮对不同外周组织的作用差异及体内、外机制异同。该课题对阐明穗花杉双黄酮降糖作用机制具有重要意义，为将穗花杉双黄酮开发成天然降糖新药提供理论基础和实验依据，也为从中药、天然药中寻找疗效确切、机制明确的降糖药物提供研究思路。

穗花杉双黄酮是本课题组前期实验从卷柏中筛选出的降糖活性成分，也是卷柏的主含成分，初步实验证明其降糖作用显著。本课题组从整体、细胞、蛋白质分子水平上进一步研究其降糖作用靶点和作用机制；并研究了其对内皮细胞的保护作用及其作用机制。采用胰岛素抵抗特性的HepG2肝细胞模型，研究穗花杉双黄酮对胰岛素抵抗形成过程的干预作用和形成后的治疗作用；采用糖尿病小鼠模型，免疫组化观察控制葡萄糖跨膜转运的蛋白GLUT-4分布，Western检测糖代谢关键酶类GK、PFK、PK、GS、G6Pase、PEPCK和胰岛素信号蛋白PI3K、Akt等表达，光镜观察胰腺及胰岛素应答组织结构的变化；比较穗花杉双黄酮对不同外周组织的作用差异及体内、外机制异同。结果显示，穗花杉双黄酮可改善糖脂代谢紊乱；调节糖代谢酶的活性；穗花杉双黄酮可激活PI3K/Akt通路这可能是其潜在的降糖作用机制之一；并且穗花杉双黄酮 对糖尿病小鼠无明显的肝肾损害。.此外，我们在TNF-α诱导人脐静脉内皮细胞的基础上，观察卷柏中穗花杉双黄酮对血管内皮活性因子，血管内皮粘附因子和炎症因子蛋白表达的影响，研究对与其有关的NF-κB信号通路活化的影响；采用MTT法、激发光共聚焦显微镜技术、ELISA法结合Western-blot技术对穗花杉双黄酮抗TNF-α诱导的血管内皮损伤进行研究。实验结果显示穗花杉双黄酮可增加NO含量，抑制IL-6、IL-8、ET-1的表达，下调VCAM-1、E-selectin、NF-κBp65蛋白的表达，上调IκBα蛋白的表达，减少NF-κBp65从胞浆向胞核中的迁移。提示穗花杉双黄酮对血管内皮有保护作用，其作用机制可能是通过抑制NF-κB信号通路的激活来下调下游炎症因子和氧化损伤因子发挥作用。.本研究为将穗花杉双黄酮开发成天然新药提供理论基础和实验依据，也为从中药、天然药中寻找疗效确切、机制明确的降糖药物提供研究思路。