TP53基因调控的miRNAs在非小细胞肺癌中的抑癌作用及其预后预测

Lung cancer is the most common malignant tumor in our country, which serious influence the healthy level of our resident. Literature and our previous study show that the p53 gene plays an important role in the development of lung cancer. In recent years, some studies suggest that p53-regulated miRNAs plays an important role in cell signaling pathways mediated by p53. In order to explore the molecular mechanism of p53-regulated miRNAs in the development of non-small cell lung cancer, we investigated the p53-regulated miRNAs using miRNA expression profiling, and then try to elucidate the biological effects and underlying mechanisms of p53-regulated miRNAs in the development of lung cancer. At last, to explore the clinical application value, we plan to carry out an correlation analysis between p53-regulated miRNAs and tumor classification, stage and prognosis of those participates. The study may provide new reference for the individualized treatment of lung cancer, help to clarify its mechanism of p53 signaling pathways in the development of lung cancer.

肺癌是最为常见的恶性肿瘤，严重影响我国居民健康，文献和我们的研究表明p53在肺癌的发生发展中发挥这重要的作用，近年来一些研究表明一些miRNA受p53调控，在p53介导的细胞信号通路中具有重要作用，为探寻p53调控的miRNA在非小细胞肺癌中的作用机制，我们拟通过miRNA芯片筛选出受p53调控的miRNA，并深入研究上述miRNA在肺癌发生发展中的作用及其机制，最后通过在临床标本中分型分期及其预后进行相关分析，探索其临床应用价值。上述研究可能为肺癌的个体化治疗提供新的治疗参考，对阐明p53信号通路在肺癌发生发展中的机制也具有重要意义。

肺癌是最为常见的恶性肿瘤，严重影响我国居民健康，研究表明p53在肺癌的发生发展中发挥这重要的作用，近年来一些研究表明一些miRNA受p53调控，在p53介导的细胞信号通路中具有重要作用，为探寻p53调控的miRNA在非小细胞肺癌中的作用机制，我们通过GEO和TCGA数据库筛选出p53调控的9个miRNA，利用腺癌患者预后数据分析发现hsa-miR-145、hsa-miR-30d、T分期和N分期为肺腺癌独立预后危险因素，选择表达差异倍数最高的hsa-miR-30a-5p在自有标本60对肺癌组织和癌旁组织进行验证发现hsa-miR-30a-5p在非小细胞肺癌中表达下调，并且与T分期和N分期以及临床分期显著相关。将A549和H460细胞系感染慢病毒，从而改变细胞中hsa-miR-30a-5p的表达水平，功能学实验结果显示，过表达hsa-miR-30a-5p后，非小细胞肺癌细胞增殖能力受到抑制，增殖减慢；细胞凋亡受到促进，凋亡细胞所占比例增加；细胞迁移能力受到抑制，迁移细胞数减少；反之，非小细胞肺癌细胞增殖能力增强，增殖加快；细胞凋亡受到抑制，凋亡细胞所占比例减小；细胞迁移能力增强，迁移细胞数增多。但是并未观察到hsa-miR-30a-5p对细胞周期分布造成影响。利用PROMO和Jaspar数据库进行预测，得到p53可能与MIR30A启动子区存在结合位点，应用ChIP实验和PCR验证，p53的确可以直接结合到MIR30A启动子区并促进其转录，从而提高hsa-miR-30a-5p的表达水平。应用TargetScan和starBase等数据库对预测到SOX4可能是hsa-miR-30a-5p的靶基因，应用双荧光素酶报告基因实验和Western Blotting实验验证，hsa-miR-30a-5p可以直接结合到SOX4的3’-UTR区并抑制SOX4的表达。回复实验结果表明，SOX4可以部分回复hsa-miR-30a-5p对细胞增殖、凋亡和迁移的影响，进一步说明hsa-miR-30a-5p通过靶向作用于SOX4对细胞的生物学行为产生影响。在细胞中过表达SOX4后p53蛋白表达水平增高，说明SOX4可以促进p53蛋白的表达，确认了p53/hsa-miR-30a-5p/SOX4反馈通路及其在非小细胞肺癌中发挥的作用和功能。本研究为今后肺癌患者预后改善和靶向分子治疗提供新的科学依据。