牛CMYA1基因及其同一家族成员CMYA4和CMYA5的功能研究

CMYA家族基因在肌纤维形成和发育过程中起重要作用，参与心肌和骨骼肌的形成和发育。在前期的研究中我们开展了对CMYA1、CMYA4、CMYA5基因的克隆、外显子SNP筛查以及与肌肉生长和肉质的关联分析、real-time PCR等工作。获得了牛CMYA1、CMYA4、CMYA5的序列，并证实了其在牛心肌和骨骼肌的表达。目前对CMYA基因的研究报道主要集中在人、小鼠和鸡，经初步研究，我们推测该基因家族在牛骨骼肌细胞的发育和形成中也起着重要的作用，为此，我们将设计免疫共沉淀、酵母双杂交、免疫组化和启动子荧光素酶报告基因等实验以验证并深入研究其重要作用。本课题将为深入了解CMYA家族基因在决定牛肌纤维形成中的作用做铺垫，为转基因肉牛研究提供新的目标基因。

1.获得CMYA基因家族5个基因CMYA1、CMYA2、CMYA3、CMYA4、CMYA5的mRNA序列，分别提交NCBI数据库获得序列号HQ111436.1、HQ637268.1、JX276659、JX276660、JN089720.1发现牛CMYA1基因存在两个剪接体，结合牛基因组草图完成了五个基因的染色体定位，预测了蛋白序列结合蛋白序列和蛋白特点和结构。.2.发现并检测了CMYA1 SNP rs110346467和SNP rs110575295、CMYA2 SNP rs136227825、CMYA4 SNP rs109057450、CMYA5 SNP rs133758443 rs133968857 rs134111738。.3.将检测到的SNP分别进行了性状关联分析，确定了SNP rs110575295、SNP rsrs136227825、SNP rs109057450、SNP rs133758443与牛肌肉生长和肉质性状的关联。.4.利用ABI SybrGreen PCR Master Mix 荧光定量PCR 分析了该基因家族5个基因在牛心脏、背腰最长肌、皮肤、脂肪、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、网胃、臀肌的表达量，发现CMYA1、CMYA3和CMYA4在心肌表达量最高，背腰最长肌中的表达量比较低，其它组织无表达；CMYA2和CMYA5所有组织均有表达，心肌表达量最高，但是CMYA2在背腰最长肌和肝脏的表达量比较低，而CMYA5在背腰最长肌和脾脏的表达量比较低。.5.利用clontech酵母双杂系统鉴定牛骨骼肌中的与CMYA1发生互作的蛋白，进行了酵母双杂交文库的构建和筛选鉴定，获得2个互作蛋白（牛的X染色体基因组的一个片段NC_007331.4和牛的环指蛋白1）。.6.获得了牛肌肉特异性启动子CMYA1 promoter1155bp并在C2C12(小鼠成肌细胞)特异性表达。.7.发表SCI论文1篇，申请发明专利2项（申请号：201210462180.6一种牛屠宰性状相关基因CMYA4的克隆及应用；申请号：201210462467.9一种牛肉质相关基因CMYA1的克隆及应用）。