DC-SIGN介导的免疫调控在真菌性角膜炎发病机制中的研究

Fungal keratitis (FK) is a severe blindness causing disease. Dendritic cell-specific intercellular adhesion molecule-3-grabbing non-integrin (DC-SIGN), as a pattern recognition receptor, can recognize the pathogen-associated molecular patterns of fungi. This research intends to analyze the immune regulation role of DC-SIGN. First, we will detect the expression and source of DC-SIGN in fungal keratitis. And then explore the effect of DC-SIGN on neutrophils infiltration, fungi killing, apoptosis and the balance of pro- and anti-inflammatory cytokines and the balance of Th cells differention by the methods of confocal microscopy, Western blot, ELISA, Real-time PCR, and flow cytometry et al. Analyze the relationships among DC-SIGN and downstream pathways. We will detect the effect of DC-SIGN on TLR4, Dectin-1, LOX-1 and Mincle pathways and determine the special significance of DC-SIGN in the complex network and the importance of host immune condition. Explore the influence of DC-SIGN DNA methylation and genetic polymorphism in antifungal immunity of cornea and the influence of rapamycin on DC-SIGN. Observe the influence of immunosuppressant such as Rapamycin on DC-SIGN in the course of fungal keratitis. Provide new idea of immunomodulation for the treatment of fungal keratitis.

真菌性角膜炎是我国首位的感染性角膜病。DC-SIGN识别真菌参与机体免疫反应。本研究拟从动物模型及体外细胞培养分析角膜抗真菌免疫中模式识别受体DC-SIGN的作用。首先通过定性及定量实验研究DC-SIGN在真菌性角膜炎的表达、定位、细胞来源，通过阻断实验及过表达实验进一步分析DC-SIGN对中性粒细胞募集、真菌杀灭、抗炎及促炎细胞因子、Th细胞分化和细胞凋亡的影响。分析DC-SIGN通路各环节及与TLR4、Dectin-1、LOX-1和Mincle等真菌相关受体的影响，确定DC-SIGN在免疫调控中的重要意义，论证DC-SIGN在真菌性角膜炎的免疫调控作用以及机体微环境对其功能的影响。分析DC-SIGN基因遗传学及DNA甲基化改变对发病及病程的影响，在此基础上分析雷帕霉素等免疫抑制剂是否通过调节DC-SIGN发挥免疫调控作用，进一步解释真菌性角膜炎致病机制，为真菌性角膜炎的治疗提供新思路。

1..项目背景：.真菌性角膜炎是一种由致病真菌感染引起的严重的致盲眼病，药物和手术治疗效果不理想，深入寻找真菌性角膜炎关键的致病机制和治疗靶点意义重大。真菌本身和宿主的免疫防御共同参与真菌性角膜炎的发病。DC-SIGN作为C-型凝集素超家族成员，在病原感染后的免疫调节中发挥关键作用，但DC-SIGN 在真菌性角膜炎发病中的作用及机制尚未阐明。.2..主要研究内容.（1）以真菌性角膜炎动物模型为研究对象，检测真菌感染后小鼠角膜中DC-SIGN在基因水平、蛋白水平的表达变化。探究DC-SIGN siRNA阻断DC-SIGN后，对真菌性角膜炎炎症的抑制作用及作用机制。（2）探明DC-SIGN的基因多态性与真菌性角膜炎的易感性的相关性。（3）探究雷帕霉素对真菌感染的角膜上皮细胞和树突状细胞、巨噬细胞DC-SIGN表达的影响、作用机制以及对真菌性角膜炎DC-SIGN功能的作用。（4）检测不同类型的免疫抑制剂对DC-SIGN功能调控的协同作用。.3..重要结果.(1) 证实真菌性角膜炎发病过程中DC-SIGN规律性表达，特异性干扰DC-SIGN后可通过Raf-1通路减轻烟曲霉菌感染的角膜炎症反应。（2）DC-SIGN rs735239、rs735240 SNPs与真菌性角膜炎的易感性密切相关。(3) 雷帕霉素可通过ERK1/2、p38MAPK磷酸化作用于DC-SIGN，还可通过DC-SIGN通路影响Th细胞分化以及真菌性角膜炎的病程。（4）环孢霉素A或FK506与雷帕霉素对DC-SIGN表达、真菌性角膜炎临床评分及Th细胞分化具有协同作用。.4..科学意义.全面论证C-型凝集素超家族成员DC-SIGN在真菌性角膜炎发病中的作用及机制。DC-SIGN 在角膜抗真菌免疫应答过程中可以识别病原真菌，并影响Th 细胞的平衡参与真菌性角膜炎的病理过程。明确DC-SIGN 基因多态性与真菌性角膜炎发病遗传易感型的相关性。DC-SIGN 有望成为真菌性角膜炎的治疗靶点。