茉莉酸甲酯对miR-145干扰神经母细胞瘤N-myc表达的调控作用及机制研究

原癌基因N-myc过度表达与神经母细胞瘤恶性进展密切相关。我们初步发现：作为一种新型植物激素，茉莉酸甲酯能促进神经母细胞瘤细胞miR-145表达和N-myc 转录后沉默，生物信息学分析显示N-myc基因存在miR-145的调控位点。本课题在解析神经母细胞瘤组织和细胞miR-145、N-myc表达相关性的基础上，通过3'-非翻译区-报告基因转染、miRNA表达/拮抗实验，观测miR-145对神经母细胞瘤细胞N-myc表达的干扰作用；通过miR-145报告基因转染、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B活化及N-myc表达检测，观测茉莉酸甲酯对miR-145转录及其干扰神经母细胞瘤N-myc表达的作用；在细胞和整体水平观测茉莉酸甲酯对神经母细胞瘤生物学行为的影响，揭示茉莉酸甲酯对miR-145干扰神经母细胞瘤N-myc表达的调控作用及机制，丰富N-myc基因表达调控机理，为神经母细胞瘤的治疗提供新途径。

神经母细胞瘤是常见的小儿颅外恶性肿瘤，起源于胚胎神经嵴，进展迅速，易侵袭转移。原癌基因N-myc的扩增和过度表达与神经母细胞瘤侵袭、转移密切相关，但其表达调控机制尚未完全解析，靶向干预途径有待深入研究。本研究发现：新型植物激素茉莉酸甲酯能显著促进神经母细胞瘤细胞中抑癌基因p53表达和微小RNA145 (miR-145) 的转录水平；荧光素酶-报告基因和染色质免疫沉淀实验证实：p53能靶向结合并活化miR-145启动子，且在茉莉酸甲酯上调miR-145过程中具有重要作用；在神经母细胞瘤组织和细胞中，miR-145、N-myc表达呈显著负相关；过表达或拮抗miR-145能分别下调、上调神经母细胞瘤细胞中N-myc的表达水平，3′-非翻译区-报告基因实验证实N-myc是miR-145的直接靶基因。通过建立稳定过表达或拮抗miR-145的神经母细胞瘤亚克隆细胞株，进一步发现miR-145能通过靶向抑制N-myc基因表达，阻遏神经母细胞瘤细胞的体内外侵袭、转移活性，且在茉莉酸甲酯抑制神经母细胞瘤恶性进展中发挥重要作用。因此，本项目率先在国内外揭示了茉莉酸甲酯对miR-145干扰神经母细胞瘤N-myc表达的调控作用及机制，丰富了N-myc基因表达调控机理，为神经母细胞瘤的治疗提供了新途径和研究基础，具有广阔的应用前景和潜在的社会、经济效益。