利用体细胞基因打靶突变技术制作CETP基因敲除家兔模型研究

心血管疾病（CVD）是引起人类死亡最常见疾病，胆固醇酯转移蛋白（CETP）通过调节高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）代谢而在CVD形成和发展中起重要作用。家兔模型研究人类CVD具有独特优势，目前不能通过胚胎干细胞基因打靶突变途径培育基因敲除（KO）家兔模型。本课题拟构建家兔CETP基因3～6外显子缺失的突变载体，采用体细胞基因打靶突变技术，将突变的CETP基因导入到家兔成纤维细胞,筛选出CETP KO (CETP+/-)成纤维细胞系。通过核移植技术，将CETP+/-成纤维细胞移植到去掉核的家兔卵母细胞中，得到CETP+/-家兔胚胎。实施胚胎移植获得CETP+/-克隆家兔。杂交后培育成功纯合CETP KO（CETP-/-）家兔模型。初步观察CETP KO家兔生长发育、血脂、脂蛋白谱等其他生物学特征，为研究CETP及其抑制剂在CVD形成和发展中作用、预防和治疗人类相关疾病提供新型动物模型。

心血管疾病（CVD）是引起人类死亡最常见疾病，胆固醇酯转移蛋白（CETP）通过调节高密度脂蛋白胆固醇代谢而在CVD 形成和发展中起重要作用。在本研究中（1）课题组克隆了家兔CETP基因、研究CETP在家兔各个组织的表达情况，比较分析了不同物种家兔CETP，发现家兔CETP主要在肝脏中表达、和豚鼠、地鼠等实验动物相比，家兔更适合探究人类CETP；我们发现高胆固醇血症家兔肝脏、血浆CETP和家兔动脉粥样硬化受伤存在某种关联。（2）制作成功家兔肝脏特异性表达人类CETP的转基因家兔，该模型家兔血浆CETP水平明显提高、活性显著增强。（3）调整实验策略，利用TALEN技术，作为家兔CETP体细胞打靶突变的补充，实施新打靶性方案。构建、筛选了高效TALEN真核表达质粒，转录为RNA，进行受精卵胞浆显微注射，已经获得第一代仔兔，正在进行基因型鉴定。后续将重点研究CETP在CVD 形成和发展中作用，为预防和治疗人类相关疾病提供帮助。