从TGF-β1/Smad通路出发探讨中药防治糖尿病肾病的分子药理作用机制

糖尿病肾病（DN）是糖尿病（DM）患者临床常见而难治的微血管并发症，已成为终末期肾病和DM患者死亡的主要原因，但发病机理和防治尚待进一步研究。转化生长因子-β1（TGF-β1）在DN发病中发挥重要作用。近来发现的Smad蛋白是TGF-β受体的胞内激酶底物，介导了TGF-β的胞内信号转导，研究DN 时TGF-β1/Smad 信号通路的变化，无疑有助于揭示DN发病的分子机制。中药肾康丸临床和动物实验表明具有保护DN肾脏，延缓DN进程的作用，但作用机制还不清楚。本项目通过建立链脲佐菌素（STZ）致DN大鼠模型，体外高糖刺激下培养大鼠系膜细胞（MC），观察大鼠肾脏及MC TGF-β1、Smad 2、Smad 3、Smad 7及纤连蛋白（FN）表达情况，探讨TGF-β1/Smad 信号通路在DN发生发展中的作用，开辟DN研究的新途径。同时研究肾康丸对该通路的影响，探讨中药改善DN的分子药理作用机制。

糖尿病肾病（DN）是糖尿病（DM）患者临床常见而难治的微血管并发症之一，是导致终末期肾病和DM患者死亡的主要原因。如何有效地预防、治疗DN已成为医学界共同关注的问题。发挥中医药治疗DN的优势和特色，积极探求中医药治疗DN的有效方法，防止或延缓其发展具有重要的意义。肾康丸作为医院制剂，临床观察和动物实验研究都表明，可改善DN一般症状，保护肾脏。但其治疗DN的细胞分子水平的作用机制还不清楚，有待进一步研究。因此，本课题通过动物和细胞实验，从TGF-β1/Smad信号通路出发，探讨了肾康丸治疗DN的细胞分子基因水平的作用机制。具体如下：. 建立大鼠DM模型，成模后分为对照组、开搏通组、肾康丸组，另设正常对照组。观察肾康丸对DN大鼠模型的治疗及肾脏保护作用。与正常大鼠比较，GHb、SCr、BUN、Ccr、24 h Upro、24 h Ualb等均升高（P<0.01）；肾脏相对肾重增加（P<0.01），出现了3期左右DN病理损害。肾康丸和开搏通都可以改善大鼠基本状况，降低上述指标水平（P<0.01或P<0.05），减轻肾脏组织病理损害。DN大鼠肾脏组织中FN和TGF-β1 mRNA基因表达显著上调（P<0.01），FN、TGF-β1、Smad 2、Smad 3蛋白表达增加，而Smad 7蛋白表达降低。肾康丸和开搏通都可以抑制DN大鼠肾脏组织中FN和TGF-β1 mRNA基因表达（P<0.01），减少FN、TGF-β1、Smad 2、Smad 3蛋白表达，增加Smad 7蛋白表达。. 体外培养大鼠MC，将高糖（30 mmol•L-1）培养的MC分为5组：高糖对照组、正常血清对照组、开搏通组及肾康丸高低剂量组。另设正常葡萄糖组。高糖培养组MC细胞FN和TGF-β1含量增加，MC细胞FN和TGF-β1 mRNA表达上调（P<0.01），Smad 2和Smad 3蛋白表达增加，而Smad 7 蛋白表达降低。肾康丸和开搏通治疗后可以降低高糖诱导的FN和TGF-β1分泌量和mRNA表达的增加（P<0.01）；减少Smad 2和Smad 3蛋白的表达，增加Smad 7 蛋白的表达。. 本研究通过整体动物实验和体外细胞实验，再次证明肾康丸具有治疗DN和保护肾脏作用；其作用机理与抑制TGF-β1/Smad信号通路激活，减少MC中ECM的分泌与基因合成有关。