重症急性胰腺炎坏死与凋亡分子XIAP，HSPA5，GSK3B，RIPK1的个体差异性

重症急性胰腺炎(SAP)是外科常见危重急腹症，病死率高达50%，发生机理欠清；急性胰腺炎(AP)始发扳机点、由水肿向坏死性转化的病理基础、继发感染的细菌入侵机制等问题尚未解决。我们的前期实验获重要发现：?天然免疫跨膜蛋白TLR4野生型小鼠AP模型引发的胰腺和肺损伤、及伴随的相关基因上调，在TLR4基因缺失型小鼠不出现。?发现AP/SAP患者的TLR4 基因4个新的SNP突变位点，已登陆NCBI数据库。研究结果提示AP/SAP存在发病的内在基础。前期结果连续在国际胰腺SCI权威期刊Pancreas 发表论著3篇，奠定了进一步研究的基础。本项目继续用相关基因缺陷动物、基因沉默技术，基因敲除技术及双向电泳技术，对线粒体、内质网始发事件且可能决定AP凋亡与坏死取向的目的基因：XIAP，HSPA5，GSK3B，RIPK1等进行研究, 进一步探索AP向SAP转化细胞凋亡与坏死核心事件的内在分子基础。

【摘要】：重症急性胰腺炎(SAP)病死率高达50%，具有显著的个体化特征，发生机理欠清；凋亡与坏死调节失衡是重要机制。本项目用相关基因沉默、基因敲除及双向电泳等技术，对可能决定AP凋亡与坏死取向的相关基因进行研究, 探讨AP向SAP转化与凋亡/坏死调控的个体差异性。获得了多项研究结果： 1. 揭示了正常大鼠中凋亡与坏死相关基因XIAP，HSPA5，GSK3β，RIPK1在胰腺组织中的表达定位；各目的基因在大鼠胰腺组织中的选择性定位分布体现了其不同的职能，对于不同部位胰腺损伤的病因探究奠定了基础。 2.揭示了各目的基因（XIAP，HSPA5，GSK3β，RIPK1）在野生型急性水肿型胰腺炎（AEP）和SAP细胞模型中的表达，及其与凋亡/坏死调控、AP程度的关联及特点；提示了各目的基因在AP凋亡-坏死平衡/矛盾中较鲜明的峰值特点和时段性特点；为进一步的凋亡/坏死相关基因沉默/敲除实验提供了实验依据。 3.成功构建慢病毒介导的HSPA5、XIAP、GSK3β、RIPK1基因沉默胰腺腺泡细胞株，并揭示了在目的基因（XIAP，HSPA5，RIPK1）沉默后，AEP和SAP细胞模型中调亡与坏死信号通路相关基因、炎性介质及AP程度的变化特点。为后期深入探索AP中凋亡/坏死调节的机制研究提供了稳定的实验模型，也为凋亡/坏死的选择性干预、及干预时间、切入点提供了有价值的参考。 4.研究了AP凋亡调控通路——TLR-4及其下游靶基因的个体差异性。基因沉默/敲除细胞和动物实验结果表明：MYD88依赖和非依赖通路均参与到AP中；TRAF6在TLR-4存在时，通过凋亡通路，参与了机体凋亡的促进和胰腺炎程度的缓解；TLR-4参与了肠道细胞凋亡的调控，对细菌经肠道的移位起到保护作用，其调控的机制可能与caspase9介导的内源性凋亡途径有关。通过鉴定中国人群中AP病人存在的4个TLR4的SNP突变位点，采用免疫共沉淀对蛋白相互作用进行验证，为在人群中寻找AP差异性发病的原因及机制探究提供了新的线索。本项目已支持发表包括多篇“pancreas”在内的SCI论文11篇，MEDLINE收录国内期刊文章若干；申请发明专利两项（均已进入复审阶段）；共培养博士研究生9名，硕士研究生4名。