通里攻下法治疗重症急性胰腺炎中性粒细胞线粒体凋亡通路异常的机制

重症急性胰腺炎（SAP）是临床危重病，全身炎性反应综合征（SIRS）是SAP发展至多器官功能障碍综合征（MODS）的前期表现，阻断SIRS向MODS的进展具有重要的临床意义。中性粒细胞（PMN）是炎症反应的重要标志，如果其凋亡延迟，将释放大量炎症因子，进而加重SIRS。本课题从细胞体外实验和临床实验两方面，以通里攻下法治疗SAP为切入点，以炎症反应时PMN凋亡异常为主线，应用多种细胞分子生物学技术，从中性粒细胞的线粒体形态、膜势能变化、钙离子内流、细胞色素C释放等方面进行线粒体凋亡途径异常的研究。同时研究通里攻下法经典验方大承气汤和有效成分大黄素在上述环节中的具体作用机制。在更深层次解析重症急性胰腺炎SIRS时PMN凋亡延迟和线粒体凋亡信号传导途径异常的分子机制及中药的治疗机理和作用靶点。为大承气汤进一步开发和利用奠定理论基础，为祖国医学的通里攻下法防治急腹症疑难疾病提供新的依据。

本课题从细胞体外和临床体内研究两方面，以通里攻下法治疗重症急性胰腺炎（SAP）为切入点，以SAP全身炎症反应综合征（SIRS）时中性粒细胞（PMN）凋亡异常为主线，应用多种细胞分子生物学技术，从中性粒细胞凋亡相关蛋白，如：Fas/FasL、Bax/Bcl-xL、Caspase-3、9等的变化，到中性粒细胞的线粒体形态、膜势能变化、细胞色素C释放、钙离子内流等方面进行线粒体凋亡途径异常的研究。同时研究通里攻下法经典验方大承气汤和有效成分大黄素在上述环节中的具体作用机制。.结果如下：.1. 临床体内研究：发现SAP患者外周血PMN凋亡比正常健康者明显延迟，说明PMN凋亡延迟是SIRS发生的一个重要原因；并且PMN凋亡延迟与Fas和Caspase-3的表达量减少有关。大承气汤的主要成分大黄素可能通过诱导PMN中Fas和Caspase-3的表达，使增高的抗/促凋亡基因Bcl-xL/Bax的表达比例下调，促进SAP时PMN的凋亡，抑制PMN凋亡延迟，从而减轻炎症反应。.2. 细胞体外实验：通过经胰胆管逆行注入1.5﹪脱氧胆酸钠溶液制备大鼠SAP模型。进行大黄素、地塞米松及二者联合治疗的体外研究，发现治疗组的外周血PMN线粒体跨膜电位均比模型组显著降低（P＜0.01），这说明大黄素及地塞米松能够有效的降低PMN线粒体跨膜电位，有利于其内凋亡蛋白（如细胞色素C）的释放；通过Western Blot检测线粒体Cyt-c，结果发现大黄素治疗组、地塞米松治疗组、二者联合治疗组的PMN线粒体Cyt-c的表达均高于模型组（P＜0.01）；应用激光扫描共聚焦显微镜检测PMN胞内及线粒体的钙离子浓度变化，发现模型组的PMN凋亡率明显低于正常组，可能与PMN钙稳态失衡有关；推测大黄素可能是通过线粒体介导的细胞凋亡途径，增加PMN胞内及线粒体内钙离子浓度，降低线粒体跨膜电位，促进线粒体Cyt-c释放，进而促进PMN凋亡，减轻炎症反应。.本研究从体外实验体和临床研究两方面阐明中性粒细胞凋亡延迟在重症急性胰腺炎SIRS发生、发展中的重要意义，和大承气汤及大黄素对线粒体凋亡途径各靶点的作用机制。为大承气汤进一步开发、推广和应用奠定理论基础。发表学术论文10篇，1篇被SCI收录。举办国际会议1次，国家级会议2次。有1人次和3人次分别在国际会议及全国学术会议上进行学术演讲。培养博士1名，硕士4名。