天花粉蛋白衍生肽诱导的IL-9(+)IL-10(+)T细胞与Th9的免疫生物学特性比较研究

2008年免疫学最鼓舞人心的研究成果是IL-9(+?)IL-10(?+)Th9亚群的发现。我们同时也发现中药天花粉蛋白(Tk)可抑制Th1型细胞介导的免疫应答，并从全序列中筛选出不显示天然分子毒性而保留免疫抑制活性的Tk衍生肽－PB，能刺激初始T细胞分泌IL-4、IL-9和IL-10，此格局与最新报导的分泌2型细胞因子的Th9十分相似。为了探讨Tk及PB诱导产生的T细胞与Th9细胞的关联，了解Th9发生谱系，本项目拟设计合成更为高效低毒的Tk衍生肽四聚体(M-Tk)，依据Tk及PB可有效对抗Th1主宰的细胞免疫应答的特点，确认M-Tk可用于缓解由Th1异常活跃导致的小鼠自身免疫性疾病EAE和心脏异体移植排斥，同时深入了解M-Tk诱导的效应T细胞及Th9分化和功能行使中的免疫生物学特点，揭示Tk实施负向调节的细胞和分子机制，为发展高效低毒的原创新型药物和临床应用提供重要的实验依据。

基于我们发现天花粉蛋白可选择性诱导产生2型细胞因子的T细胞，介导对Th1型免疫应答的抑制，本项目尝试从全序列中筛选出不显示天然分子毒性而保留免疫抑制活性的Tk 衍生肽PB，设计合成更为高效低毒的PB四聚体(M-Tk)进行免疫干预，并开展其诱导的免疫抑制与T细胞亚群分化之间相应机制的分析。原定计划已全部完成，并有所拓展。包括: ⑴成功设计合成出具有负向调节活性的新制剂 M-Tk，与天然Tk相比，M-Tk不显示毒性而具有很强的免疫抑制活性, 体外可抑制可溶性抗原细胞增殖以及同种异基因MLR反应。⑵建立了Th1主宰的自身免疫实验性变态反应性脑脊髓炎（experimental allergic encephalomyelitis, EAE）模型，体内输注M-Tk可明显改善EAE临床症状，包括疾病指数（clinic scores）下降，减轻脱髓鞘反应。⑶首次揭示M-Tk可使Th1主宰的同种异基因小鼠移植心脏的存活时间从对照组的7.8天延长到26.6天以上，效果显著。⑷首次分析了M-Tk发挥抑制作用的体外机制，M-Tk引发免疫抑制的原因在于其可选择性激活一群具有下调免疫应答活性的调节性CD8+CD28- CTLA4+T细胞（CD8+ Treg）,通过上调IL-4/ IL-9/IL-10和下调IFN-gamma的分泌，使得免疫应答向Th2/Tc2偏移，从而诱导免疫抑制。其中涉及巨噬细胞MCP1蛋白的激活和TOLL样受体2（TLR2）相关分子的信号转导，这是本项目研究中的新发现和重要进展。以上为发展高效低毒的新型药物和下一步临床应用提供实验依据。项目资助论文17篇, 其中SCI收录论文3篇，国内核心期刊论文10篇，会议论文4篇，专利授权一项，专利申请一项，待发表一篇SCI论文。培养博士生1人，在读博士研究生1人，硕士研究生2人。