野菊花活性成分对肝癌上皮间质转化的影响及其分子机制

祖国医学在肿瘤的治疗中积累了丰富经验，为开发高效、低毒的抗肝癌中药带来了新途径。本课题组前期在国家自然科学基金（No.30672766）资助下发现中药野菊花体内外均具有显著的抗肝癌作用，但野菊花活性成分众多，究竟何种活性成分具有抗肝癌作用目前仍不清楚。在前期工作基础上，结合国内外相关研究，本课题组拟通过：1.采用高效液相色谱法分析筛选出野菊花富集入血的主要单体活性成分1-2种；2.利用体外培养高转移性人肝癌MHCC97H细胞、裸鼠肝癌肺转移模型等方法，观察筛选的野菊花单体成分作用前后肝癌侵袭转移、肿瘤上皮间质转化标志物及相关的转录因子、TGF-β/Smad信号转导通路等指标的变化情况，从动物、细胞、分子水平等不同层面探讨野菊花单体活性成分对肝癌上皮间质转化的影响，并阐明其分子机制。本项目为研发野菊花抗肝癌活性成分及其作用机制提供实验依据，为运用中医理论研发抗肿瘤的中药活性成分提供借鉴。

中医中药在肿瘤治疗方面积累了许多独到经验。中药特别是植物类中草药由于毒副作用相对较小，并且能抑制肿瘤生长、改善症状、提高生存质量、延长生存期等，近年来越来越受到人们的重视和青睐。湿热毒邪雍盛是中晚期肝癌的常见症候之一，其病机是由于邪热火意蕴结于内，火郁成毒，邪毒结聚日久所致，故此清热解毒法成为肝癌的主要治则之一。野菊花是常用的清热解毒类中药之一，具有广泛的药理作用。但目前对于野菊花活性成分在肝癌方面的研究尚缺乏文献报道。本项目研究发现：与空白对照组相比，野菊花活性成分低、中、高剂量组作用人肝癌MHCC97H细胞后，细胞的粘附力明显减少；细胞的迁移数目显著降低。细胞粘附分子OPN、细胞迁移分子RhoC、血管生成因子VEGF的表达水平均显著降低，细胞内MAPK/ERK信号转导通路磷酸化水平明显下降。提示，野菊花活性成分通过抑制MHCC97H细胞内MAPK/ERK信号通路的活化→下调细胞粘附、迁移、血管生成相关分子表达等多个环节，而抑制肝癌细胞侵袭转移。野菊花活性成分作用肝癌MHCC97H细胞后，对上皮间质转化的抑制作用显著：肝癌细胞表现为上皮样的多边形细胞明显增多，而间质细胞样梭形细胞和伪足明显减少，与对照组相比变化显著。筛选出的野菊花活性成分单体蒙花苷作用肝癌MHCC97H细胞后对肝癌的抑制作用显著，呈现明显的时间-剂量依赖性，为进一步研究深入研究活性单体成分抗癌作用提供依据。抑制SOCS3信号通路后肝癌MHCC97H细胞上皮标志物 E-cadherin 明显减少，而间质标志物Vimentin, α-SMA 明显增多，转录因子 Snail的活性明显增强，提示SOCS3信号通路在肝癌上皮间质转化中发挥着重要作用。血管紧张素II诱导的肝癌MHCC97H细胞血管生成因子产生通过AT1/JAK2/STAT3/SOCS3信号通路。以上均为下一步开展野菊花活性成分对肝癌细胞侵袭转移的深入干预研究奠定基础。在基金的资助下，课题发表论文总计4篇，其中SCI收录3篇，中文核心期刊1篇。