HPV导致子宫颈上皮-间充质细胞转化的研究

子宫颈癌的死亡率仅次于乳腺癌，是全球女性第二大恶性肿瘤，高危型人乳头瘤病毒（HPV）感染已被确定是子宫颈癌的致病因素。上皮-间充质细胞转化（EMT）可使上皮细胞发生恶性转化，子宫颈癌中有EMT指标的改变，但这些变化与HPV癌基因的关系尚未明了。本研究目的：探讨HPV E6/E7基因如何引起子宫颈细胞EMT，使细胞侵袭性增加，导致子宫颈癌的发生。主要内容：①明确子宫颈癌细胞系中EMT与HPV16、18 E6/E7的关系；②通过siRNA干扰子宫颈癌细胞系E6/E7基因，同时转染E6/E7于子宫颈上皮细胞，另取小鼠模型注射siRNA干扰E6/E7，检测处理前后人细胞系和动物标本中钙粘蛋白等EMT指标的变化；③取人子宫颈癌和癌前病变病灶，检测E6/E7和EMT状况。通过以上研究有望揭示EMT在子宫颈癌发病中的作用，及E6/E7通过EMT导致子宫颈细胞恶变的机理，为阻断子宫颈癌的发生提供理论依据。

子宫颈癌是全球女性第二大恶性肿瘤，高危型人乳头瘤病毒（HPV）感染已被确定是子宫颈癌的致病因素，尤以HPV16和18型最常见，与99.7%的子宫颈癌相关，E6和E7基因是HPV主要的癌基因。上皮-间充质细胞转化（EMT）可使上皮细胞发生恶性转化，子宫颈癌中有EMT指标的改变，但这些变化与HPV癌基因的关系尚未明了。本研究通过体外和体内研究分析子宫颈细胞中HPV16、18 E6/E7与EMT的关系。主要内容：①取子宫颈癌细胞系进行体外培养，与原代培养的正常子宫颈上皮细胞比较，发现子宫颈癌细胞中上皮指标E-cadherin均低表达，而间充质指标N-cadherin均高表达；②设计、合成并转染miRNA干扰子宫颈癌细胞系的HPV16、18 E6/E7基因，同时转染HPV16 E6E7于正常子宫颈上皮细胞，干扰后的子宫颈癌细胞E-cadherin表达明显升高，N-cadherin明显降低，同时Wnt1和β-catenin表达明显降低，TGF-β1 、TβRII 和Smad4也明显降低，而正常子宫颈上皮细胞转染HPV16 E6E7后E-cadherin和β-catenin明显下降，N-cadherin明显增高；③宫颈癌荷瘤小鼠注射干扰HPV16 E6/E7的miRNA后，肿瘤重量明显减轻，E-cadherin表达水平升高，N-cadherin表达降低，Wnt1、β-catenin、TGF-β1 和Smad4也明显降低；④取人子宫颈癌和癌前病变的组织标本检测发现，随子宫颈病变加重，上皮指标E-cadherin和β-catenin的表达逐渐减少，而间充质指标N-cadherin、vimentin和fibronectin的表达逐渐增多（P<0.05），且HPV16、18与E-cadherin的表达呈负相关，与N-cadherin和fibronectin的表达呈正相关。通过以上研究证明了HPV E6/E7基因可以通过EMT导致子宫颈细胞恶变，干扰E6/E7基因可以抑制肿瘤生长，并可以通过抑制Wnt/β-catenin和TGF-β/smad信号通路使EMT过程发生逆转，有望成为子宫颈癌的一种基因治疗手段。.本研究完成了课题任务内容，现已发表综述1篇，中文论著1篇，另有1篇英文论著正在投稿中，1篇英文论著正在撰写中。